ISBN 978-85-85905-10-1
Área
Alimentos
Autores
Cabral, A.M. (UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO NORTE) ; Moura, M.F.V. (UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO NORTE) ; Silva, D.R. (UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO NORTE)
Resumo
Neste trabalho, um método cromatográfico simples e rápido para identificação simultânea de Benzilpenicilina G Benzatina (PENG), Oxitetraciclina (OTC), Sulfato de Gentamicina (GEN), Sulfadoxina (SDX) e Trimetoprim (TMP) foi desenvolvido. A separação dos compostos foi realizada por cromatografia liquida de rápida eficiência acoplado a arranjo de fotodiodos (UFLC-DAD). Os procedimentos foram condicionados utilizando coluna em fase reversa C8 com fase móvel água e Acetonitrila 80:20 (v/v) em gradiente e fluxo de 1 mLmin-1. Os resultados apresentaram vantagens tais como eluição dos compostos em faixa de tempo de retenção (0,5 – 6 min) e satisfatória resolução dos picos garantido, principalmente, pela ausência de misturas interferentes que podem sobrepor-se aos picos dos antibióticos.
Palavras chaves
UFLC - DAD ; Antibióticos; Interferentes
Introdução
Os antimicrobianos da classe dos b-lactâmicos, aminoglicosídeo e sulfonamidas são utilizados para manutenção da saúde de animais produtores de alimentos. As sulfonamidas e diaminopirimidinas são utilizados para o tratamento de animais produtores de leite acometidos de doenças infecciosas, como a mastite. A administração de produtos não marcados em fêmeas lactantes e não conformidade com um período de carência de 24 horas para ordenha, é ilegal, resulta em resíduos de medicamentos veterinários em leite. A ausência de um devido monitoramento pode resultar em altas concentrações de resíduos no leite, que põem em perigo a saúde dos consumidores (SCHENCK; CALLERY, 1998). As consequências da permanência podem ser nefastas tais como, intolerância aos antibióticos, hipersensibilidade às penicilinas, reações alérgicas e interferência no processo industrial dos derivados do leite (BERENDSEN et al., 2010; BOHM; STACHEL; GOWIK, 2009; LOPEZ et al., 2008). O Ministério da Agricultura Pecuária e Abastecimento do Brasil (MAPA) estabelece métodos e admitem limite máximo de resíduos (LMR). A Cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) é utilizada para a análise simultânea de penicilinas em fluidos biológicos, formulações farmacêuticas, produtos alimentícios de origem animal, utilizando diferenciados detectores (BAILÓN-PÉREZ et al., 2009; KANTIANI et al., 2009; KARAGEORGOU; SAMANIDOU, 2011; RAMBLA-ALEGRE et al., 2011; RIEDIKER; DISERENS; STADLER, 2001; VAN HOLTHOON et al., 2010). Este trabalho utiliza cromatografia liquida de rápida eficiência acoplada a arranjo fotodiodos (UFLC-DAD) para identificação de compostos antimicrobianos a base de Oxitetraciclina (OTC), Trimetoprim (TMP), Sulfato de Gentamicina (GEN), Sulfadoxina (SDX) e Benzilpenicilina G Benzatina (PENG).
Material e métodos
1. Reagentes e Amostras Todos os reagentes utilizados foram grau HPLC, sendo acetonitrila fabricado por Merck (Darmstad, Germany) e água (resistividade > 16 MΩ). Soluções injetáveis de medicamentos antimicrobianos foram filtradas em nylon (13 mm x 0.45 µm). Os procedimentos para preparo foram descritos em Farmacopeia Americana (USP XXVIII, 2007; 2011). As soluções trabalho estão em faixa de concentrações descritas OTC (50 µgmL), TMP 10 µgmL, GEN 100 µgmL, SDX 50 µgmL-1 e PENG de 600.000 UI estoque equivalente a 77, 6367 mgmL (400 µgml) preparado em banho ultrassónico. Cada solução foi preparada da adição de padrão externo para OTC (0,5; 0,2; 0,1; 0,05; 0,01 µgmL), TMP (0,1; 0,05; 0,04; 0,02; 0,01; 0,002 µgmL), GEN (0,1; 0,4; 0,2; 0,1; 0,02 µgmL), SDX (0,5; 0,2; 0,1; 0,05; 0,01 µgmL) e PENG (0,5; 0,2; 0,1; 0,05; 0,01 µgmL). 1.2 Instrumentação, Condições do Sistema Cromatográfico e A separação dos compostos foi realizada em sistema UFLC , MODELO LC-20. A coluna de fase reversa de C8 (4,6 mm x 25 cm, 5 μm). A composição da fase móvel tem sido água e acetonitrila 80:20 (v/v). As melhores condições foram em fluxo de 1 mLmin-1, a temperatura era de 40 °C e modo de injeção por loop com limite 5µL. O detector utilizado foi com arranjo de foto diodos, o comprimento de onda foi selecionado de acordo com o máximo de absorbância para cada família de beta-lactâmicos, sendo que para é de 220 nm referenciado. As Medições foram realizados em 220, 266, 280, 300 e 358 nm. Dados coletados pelo
Resultado e discussão
Na separação cromatográfica dos antibióticos foram consideradas as condições previstas pela eficiência do sistema de cromatografia e seletividade de colunas de cromatografia (SPISSO et al., 2007). Levou-se em consideração as condições expostas pelo sistema cromatográfico UFLC – DAD e as referenciadas pela literatura utilizadas na identificação de antibióticos da classe da tetraciclina que são as de sílica de fase reversa C8 ou C18. Desta maneira, a utilização de uma coluna de HPLC de fase reversa C8 com um grupo polar incorporado causa proximidade com a superfície da sílica, permitindo melhor seletividade, reduzindo a largura do pico e de retenção para as tetraciclinas estudados em comparação com as colunas a base de sílica alquilo C8 e não altera a ordem de eluição dos compostos. O objetivo deste estudo sobre o controle de qualidade dos medicamentos veterinários, substâncias que necessitam certificados para que seus resíduos são controlados e o LMR não devem ser ultrapassados para segurança dos alimentos. Para cada um dos analitos investigados, foram empregados procedimentos simples e capaz de detectar dentre da faixa de concentração da curva analítica e em acordo com o LMR. O planejamento das condições cromatográficas minimizar os erros nas medidas e prevenir aparecimento de sobreposição de picos interferentes. As medidas foram preconizadas em seguidas injeções em níveis de 1,2, 3 e 4 uL, conforme mostra a Tabela 1 presente na Figura 2 que mostra a faixa de concentração escolhida está de acordo com o limite máximo de resíduos em matriz leite bovino que varia entre 50 – 200 µgmL. Os resultados mostraram que o método desenvolvido é adequado para identificar os antimicrobianos em medicamentos veterinários estudados, porque seus erros foram minimizados.
A Figura 1 mostra as principais informações e estrutura química dos compostos (OTC, TMP, GEN, SDX e PENG).
A Figura 2 mostra a separação cromatográfica de OTC, TMP, GEN, SDX e PENG. O procedimento está em quatro níveis, com respectivos erros das medidas.
Conclusões
O método desenvolvido para identificação simultânea de OTC, TMP, GEN, SDX e PENG em soluções injetáveis de medicamentos veterinários mostrou resultados satisfatórios na identificação deste antibiótico, utilizando UFLC – DAD porque combina a especificidade, com sensibilidade, reprodutibilidade, custo-efetividade e rápida obtenção do sinal analítico dos compostos.
Agradecimentos
Os autores agradecem a CAPES e UFRN pelo suporte.
Referências
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