Realizado em Maceió/AL, de 28 a 30 de Agosto de 2013.
ISBN: 978-85-85905-04-0
TÍTULO: AVALIAÇÃO DE ATIVIDADE ANTIBACTERIANA EM EXTRATOS METANÓLICO, SALINO E LECTINA DE Stryphnodendron adstringens
AUTORES: Melo, A.S. (UFPE) ; Silva, D.G.R. (UFPE) ; Cunha, M.C. (UFPE) ; Gomes, F.S. (UFPE) ; Napoleão, T.H. (UFPE) ; Coelho, L.C.B.B. (UFPE) ; Paiva, P.M.G. (UFPE) ; Sá, R.A. (UFPE)
RESUMO: Lectinas são proteínas extraídas de plantas com diversas propriedades biológicas,
inclusive a antibacteriana. O presente trabalho objetivou investigar a atividade
antibacteriana em extratos metanólico (EM), salino (ES8) e lectina
(PII) da entrecasca de Stryphnodendron adstringens, o 'barbatimão'. F4
apresentou melhor AHE (270034 mg/mL), sendo levada à purificação da lectina de S.
adstringens. Quanto à concentração mínima inibitória (CMI) e mínima bactericida
(CMB) (COURVALIN et al.,1985), o EM apresentou excelentes índices de CMI e CMB
(μg/mL) para S. aureus (15,62 e 31,25) e S. enteritidis (0,97 e 3,9); enquanto
ES8, (13875 e 27750) e (216,79 e 6937), respectivamente. PII apresentou
índices de CMI apenas para S. enteritidis e E. coli (2,93 e 1500, resp.).
PALAVRAS CHAVES: S. adstringens; Lectinas; Antibactericida
INTRODUÇÃO: As bactérias são organismos micro ou submicroscópicos de organização celular
simples, distribuídos isoladamente ou em colônias. Podem viver na presença de ar
(aeróbias), na ausência de ar (anaeróbias), ou serem anaeróbias facultativas.
Suas estruturas podem ser observadas através da Técnica de Gram (GRAM, 1884),
dividindo por análise colorimétrica as bactérias em Gram-positivas (azuis/roxas)
e Gram-negativas (vermelhas). Elas exercem importantes funções ecológicas, sendo
sua relação com outros organismos benéfica ou parasitária. Das mais simples às
mais complexas, estima-se que boa parte das doenças que atingem os humanos é de
origem bacteriana. Estes patógenos vêm criando resistência cada vez maior frente
aos antibióticos já utilizados na medicina, justificando então a necessidade da
investigação de novos medicamentos que possam combatê-los. As lectinas são
proteínas que interagem seletiva e reversivelmente com monossacarídeos e
glicoconjugados (LIS & SHARON, 1986). Em vegetais, são frequentemente isoladas
de sementes, folhas e entrecascas. De acordo com esta especificidade, elas
apresentam várias propriedades biológicas, como inseticidas, antimicrobianas e
antitumorais (VAN DAMME et al., 1998). Stryphnodendron adstringens (Leguminosae-
Mimosoidae), o "barbatimão", é uma árvore nativa do cerrado brasileiro que se
destaca pelo elevado teor de taninos em sua casca, sendo muito utilizada como
cicatrizante e adstringente. Além de taninos, ela possui diversos metabólitos
secundários, tais como alcaloides, flavonoides e saponinas (SIMÕES et al.,
2004). Este trabalho objetivou avaliar a atividade antibacteriana de preparações
da entrecasca em extratos metanólico e salino, preparação lectínica e lectina
isolada de S. adstringens, utilizando quatro cepas de bactérias distintas.
MATERIAL E MÉTODOS: 3 g da farinha da entrecasca de S. adstringens foram submetidas à infusão
metanólica (10 mL) com agitação por 30 minutos (EM), posteriormente submetido à
filtração simples. Outros 10g de farinha da planta foram submetidos à extração
proteica em NaCl 0,15 M por 8h (ES8). A atividade lectínica (AH) de
ES8, relacionada à especificidade e afinidades dos sítios de ligação
das lectinas a carboidratos das paredes dos eritrócitos, foi realizada de acordo
com KENNEDY et al. (1995), onde a AH correspondeu ao inverso da maior diluição
(título -1) que ainda se observou a aglutinação total dos
eritrócitos. EB8 foi avaliado quanto à presença de proteínas por
espectrofotometria através do método de LOWRY et al. (1951). A etapa inicial de
purificação foi realizada com o fracionamento das proteínas de EB8
através da adição de Sulfato de Amônio 1,0 M, segundo GREEN e HUGHES (1955). Em
seguida, o precipitado (F4) foi submetido à diálise exaustiva com
H2O e NaCl 0,15 M (4h cada) e avaliado na presença de carboidratos.
F4 foi aplicado em coluna de quitina, equilibrada com NaCl 0,15 M. O
Pico Protéico Ativo (PII) foi eluído com Ácido Acético 1,0 M, sendo submetido à
diálise exaustiva com H2O (4h) e liofilização. EM, EB8 e
PII foram filtrados e avaliados quanto à atividade bactericida pelo ensaio de
microdiluição seriada. As bactérias foram fornecidas pelo Departamento de
Antibióticos da UFPE, sendo elas: Staphylococcus aureus (ATCC-6538), Escherichia
coli (ATCC-25922), Salmonella enteritidis (ATCC-13076) e Klebsiella pneumoniae
(ATCC-29665), sendo cultivadas num Erlenmeyer (250 mL) contendo Caldo Nutritivo
DifcoTM (CN) e incubadas overnight a 37°C sob agitação orbital (100 rpm).
RESULTADOS E DISCUSSÃO: A fração F4 apresentou a melhor AHE (270034,0), determinada pela
razão entre AH e concentração de proteínas (mg/mL); caracterizando-se então
material adequado para a purificação da lectina de S. adstringens. A AH de
F4 foi parcialmente inibida por N-acetilglicosamina (quitina),
apontando a possibilidade de purificação da lectina através de cromatografia em
colunas de Quitina. O Pico Proteico Ativo (PII) obtido através desta
cromatografia (1,0 mg/mL de proteínas) e eluído com Ácido Acético 1,0 M foi
definido como a Lectina de S. adstringens. O método de atividade antibacteriana
escolhido é muito utilizado para a análise de extratos vegetais, classificado
por Eloff (1998) como um método 30 vezes mais sensível e de melhor relação
custo-benefício em relação às demais técnicas, garantindo maior confiabilidade
aos resultados obtidos nestes ensaios. Quanto à avaliação do crescimento
bacteriano, foram obtidos os seguintes resultados, expressos na tabela 2.
Observou-se que o extrato metanólico apresentou os melhores índices de CMI e CMB
para as cepas de S. aureus e S. enteritidis, indicando que, em concentrações
muito baixas, o EM é capaz tanto de inibir visivelmente o crescimento das mesmas
como de conseguir eliminar 99,9% dos seus inóculos originais. O extrato salino
também se mostrou eficiente na inibição do crescimento destas bactérias, mas em
concentrações superiores ao EM. A lectina de S. adstringens apresentou bons
índices de CMI apenas para as cepas Gram-negativas, não sendo detectadas
porcentagens significativas de eliminação dos inóculos originais nas
concentrações testadas (CMB). Nenhuma atividade bactericida foi detectada para a
E. coli e K. pneumoniae, com exceção do PII para esta última (CMI = 1500 μg/mL).
Tabela 1
AH, AHE e Proteínas presentes no Extrato salino,
Fração proteica e Lectina de S. adstringens.
Tabela 2
Atividade antibactericida de EM, ES8 e PII em S.
aureus, E.coli, S. enteritidis e K. pneumoniae.
CONCLUSÕES: Concluiu-se que EM, ES8 e PII de S. adstringens possuem melhor atividade
bactericida em cepas Gram-negativas (com exceção de K. pneumoniae), podendo ser
úteis na formulação de novos fármacos destinados a estes e outros patógenos.
Segundo SHARON & LIS, 1990; elas inibem estas bactérias em função da presença da
N-acetilglicosamina na camada de peptidioglicanos destas. Uma vez ligados à
lectina, os peptidioglicanos não mais auxiliam na sua alimentação, afetando seu
crescimento e desenvolvimento. Além disso, a presença de metabólitos secundários
importantes nos extratos reforça a ação bactericida.
AGRADECIMENTOS: À Propesq - UFPE, pelo apoio financeiro; ao Departamento de Antibióticos e ao
laboratório de Glicoproteínas da UFPE pelo material biológico cedido.
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