ÁREA
Iniciação Científica
Autores
Bezerra de Melo, N. (UNIVERSIDADE ESTADUAL DO CEARÁ) ; Carneiro Romão, I. (UNIVERSIDADE ESTADUAL DO CEARÁ) ; Maria Barros Alves, A. (UNIVERSIDADE ESTADUAL DO CEARÁ) ; Silva dos Santos, H. (UNIVERSIDADE ESTADUAL VALE DO ACARAÚ) ; Eire Silva Alencar de Menezes, J. (UNIVERSIDADE ESTADUAL DO CEARÁ) ; Maria Costa Siqueira, S. (UNIVERSIDADE ESTADUAL DO CEARÁ)
RESUMO
As hidrazonas compõem uma classe de compostos orgânicos, as bases de Schiff e o grupo funcional geralmente é obtido pela condesação de hidrazinas com cetonas ou aldeídos. Estes compostos apresentam propriedades biológicas, químicas, anticonvulsivantes e antifúngicas, com isso, vem ganhando destaque na medicina devido as suas propriedades, o que pode auxiliar na busca de novos fármacos. O presente trabalho tem como objetivo analisar a toxicidade aguda e o potencial ansiolítico via neuromodulação GABAérgica da hidrazona (HDZH 3OCH3) derivada da hidralazina frente a Zebrafish adulto (ZFa). Portanto, a hidrazona não foi tóxica em ZFa, causou comprometimento motor no animal e que essa hidrazona atua pela via GABA.
Palavras Chaves
Hidrazona ; Zebrafish adulto; Ansiolítico
Introdução
As hidrazonas são compostos orgânicos que possuem geralmente a seguinte estrutura: –C=N–NH–, que são derivados de substâncias carboniladas com aminas e que são obtidas pela condensação de hidrazinas com aldeidos ou cetonas (GUIMARÃES et al., 2017). De acordo com Tiago (2019), as hidrazonas apresentam caráter anticonvulsivo, antidepressivo, analgésico, antioxidante e dentre outros. Com isso, esse composto pode ser usado para criação de novos fármacos. O modelo animal escolhido para fazer o tratamento da amostra foi o zebrafish (Danio rerio). Popularmente conhecido no Brasil como “paulistinha”, o zebrafish (ZF) é um peixe teleósteo tropical de água doce pertencente à família Cyprinidae, na fase embrionária mede aproximadamente 1 a 5 mm e já na fase adulta mede 4 a 5 cm (IGOR et al., 2016). De acordo com Gerlai, et al., (2009) existem algumas vantagens do uso do zebrafish nas pesquisas, que é em relação ao acelerado crescimento, redução de custo e o conjunto de ferramentas produzidas que constituem características importantes da espécie biológica. O objetivo deste trabalho e analisar a hidrazona (E)-1-(2-(3,4,5- trimetoxibenzilideno)hidrazinail)ftalazina (HDZH 3OCH3) frente a zebrafish adulto.
Material e métodos
A hidrazona HDZH 3OCH3 foi fornecida pelo Laboratório de Química de Produtos Naturais da UECE. Todos os experimentos estão de acordo a CEUA-UECE: nº 04983945/2021. Para avaliar a toxicidade da hidrazona, Zebrafish adultos foram separados em grupos (n=6), e tratados oralmente (v.o.) com 20 μL (nas doses de 4, 20 e 40 mg/kg). Um grupo controle foi incluso (DMSO a 3 %). Durante as 96 horas de análise, foi analisado o número de mortos e os valores submetidos a estatística (Trimmed Spearman-Karber) para indicar a DL50 (ARELLANOAGUIAR et al., 2015). Outros grupos (n=6) foram tratados v.o. com mesmas doses da hidrozona, e por via intraperitoneal (i.p) com Diazepam (4 mg/kg) e DMSO 3% (grupos controles). Após 30 min, os animais foram adicionados em placas de Petri (10 x 15 cm), e analisada a locomoção dos animais através da contagem do número de cruzamento de linhas presentes na placa, durante cinco minutos (GONÇALVES et al., 2020). O efeito ansiolítico foi investigado no teste claro/escuro (BENNEH et al., 2017). Grupos (n=6) foram tratados com a hidrazona nas três doses e controles como indicado anteriormente. Após 30 min, o efeito ansiolítico foi medido com base no tempo permanecido na zona clara do aquário durante 5 minutos. O mecanismo de ação foi investigado realizando o pré-tratamento com flumazenil (4 mg/kg), um antagonista dos Benzodiazepínicos no receptor GABAA (BENNEH et al., 2017). Após 15 minutos do pré-tratamento, outro grupo de animais (n=6) recebeu oralmente a HDZH 3OCH3 (40 mg/kg 20 µL) e outro recebeu intraperitonelamente o Diazepam (20 µL). Após 1h por v.o. e 30 min por via i.p dos tratamentos, os animais foram submetidos ao teste claro/escuro descrito anteriormente. Os resultados foram expressos utilizando ANOVA (software GraphPad Prism v. 8.).
Resultado e discussão
Em relação à toxicidade da amostra, não houve morte dos animais durante as 96h
de análise, indicando que a amostra não foi tóxica, bem como não foi observado
nenhuma alteração anatômica aparente, apontando a segurança pré-clínica da
hidrazona nas doses testadas (DL50 ˃ 40 mg/kg).
No teste de campo aberto o parâmetro analisado é a atividade locomotora para
avaliar a ação de drogas que podem atuar sob sistema nervoso central do ZFa e
causar comprometimento locomotor ou não. Observou-se que a amostra HDZH 3OCH3
alterou na locomoção nas três doses testadas (****p<0,0001, vs. Controle), mas
esse efeito não é similiar ao DZP (####p<0,0001 vs. DZP) (Figura 1).
Em relação ao claro/escuro, as concentrações de 20 e 40 mg/Kg (**p<0,01;
****p<0,0001 vs. Controle) se mostraram ansiolíticas, no qual os animais
permaneceram mais tempo na zona clara do aquário, sendo estatisticamente
semelhante ao efeito do DZP (****p<0,0001 vs. controle) (Figura 2).
A amostra pré-tratada com Fmz reverteu significativamente o efeito ansiolítico
da HDZH 3OCH3 (40 mg/Kg; 20 µL; oral) (####p<0,0001 vs. HDZH 3OCH3 e DZP), bem
como reverteu o efeito ansiolítico do DZP (4 mg/Kg; 20µL; i.p). O Fmz é um
antagonista que atua pelo receptor GABAA na região de ligação dos
benzodiazepínicos, com isso, sugere-se que o efeito ansiolítico da hidrazona
seja dependente do sistema GABAérgico, visto que seu comportamento foi
semelhante ao DZP (Figura 3).
Efeito da HDZH 3OCH3 sob o comportamento locomotor \r\ndo Zebrafish (Danio rerio) adulto no Teste de Campo \r\nAberto (0–5 min)
Efeito da HDZH 3OCH3 sob o comportamento de \r\nansiedade de Zebrafish (Danio rerio) adulto no teste \r\nclaro e escuro (0–5 min)
Mecanismo de ação GABAérgica da HDZH 3OCH3 (40 \r\nmg/kg) sob o comportamento de ansiedade de Zebrafish \r\nadulto no Teste claro e escuro (0–5min)
Conclusões
Os dados obtidos neste estudo revelam que a HDZH 3OCH3 causou comprometimento motor em relação ao campo aberto, a amostra pode ser considerada atóxica durante as 96h de análise em ZFa e que essa hidrazona atua pela via GABA. Dessa forma, podendo avançar para estudos mais aprofundados que direcionem sua utilização no tratamento de doenças.
Agradecimentos
A UECE pelo espaço para realização deste trabalho,Laboratório de Química dos Produtos Naturais pelo auxílio nos testes e pelo apoio financeiro da Coordenação de Aperfeiçoamento de Aperfeiçoamento de Pessoa de Nível Superior(CAPES)
Referências
ARELLANO-AGUIAR, O., et al. Use of the zebrafish embryo toxicity test for risk assessment purpose: case study. Journal of FisheriesSciences, v. 9, n. 4, p. 52, 2015.
BENNEH, C. K. et al. Maerua angolensis stem bark extract reverses anxiety and related behaviours in zebrafish-Involvement of GABAergic and 5-HT systems. J. Ethnopharmacol., v. 207, p. 129–145, 2017.
BINEY, R. P. et al. Attenuation of anxiety behaviours by xylopic acid in mice and zebrafish models of anxiety disorder. J. pharm. biosci., p. 07-16, 2018.
DOS SANTOS, I.V.F. et al. Use of zebrafish (Danio rerio) in experimental models for biological assay with natural products. African Journal of Pharmacy and Pharmacology, v. 10, n. 42, p. 883-891, 2016.
GERLAI, R; FERNANDES, Y; PEREIRA, T. Zebrafish (Danio rerio) responds to the animated image of a predator: towards the development of an automated aversive task. Behavioural brain research, v. 201, n. 2, p. 318-324, 2009.
GONÇALVES, N. G. G. et al. Protein fraction from Artocarpus altilis pulp exhibits antioxidant properties and reverses anxiety behavior in adult zebrafish via the serotoninergic system. JFF, v. 66, p. 1-12, 2020.
GUIMARÃES, D. G. et al. Investigação do Potencial Biológico de Hidrazonas Obtidas Sinteticamente na Última Década (2006-2016): Uma Revisão Sistemática. Rev. Virtual Quim, v. 9, n. 6, p. 2551-2592, 2017.
TIAGO, F. S. Descrição teórica de complexos de metais de transição com ligantes hidrazona com potencial aplicação farmacológica. 2015.
