Autores
Chavez-orellana, H. (UNIVERSIDAD NACIONAL SAN LUIS GONZAGA) ; Molina-cabrera, A. (UNIVERSIDAD NACIONAL SAN LUIS GONZAGA) ; Ferreyra-paredes, C. (UNIVERSIDAD NACIONAL SAN LUIS GONZAGA) ; Quispe-ciprian, L. (UNIVERSIDAD NACIONAL SAN LUIS GONZAGA) ; Garayar-flores, R. (HOSPITAL REGIONAL DE ICA) ; Alvarado-yarasca, A.T. (UNIVERSIDAD SAN IGNACIO DE LOYOLA) ; Ramos-gamarra, R. (UNIVERSIDAD NACIONAL SAN LUIS GONZAGA) ; Palomino-jhong, J. (UNIVERSIDAD NACIONAL SAN LUIS GONZAGA) ; Kong-chirinos, J. (UNIVERSIDAD NACIONAL SAN LUIS GONZAGA)
Resumo
El objetivo de la investigación fue evaluar el efecto cicatrizante del extracto
etanólico de las hojas de Leucaena leucocephala (Lam.) de Wit, se usaron
reactivos de coloración y precipitación para identificar metabolitos
secundarios. La actividad cicatrizante se evaluó midiendo la resistencia a la
tracción de la herida en ratones, y posterior estudio histológico en muestras de
la piel regenerada. Se identificaron taninos, flavonoides, Triterpenoides y/o
Esteroides, antraquinonas, Leucoantocianidinas en la fracción D y Catequinas en
la fracción E, Saponinas. El extracto etanólico al 110% tuvo la mayor actividad
con un 214,1% de eficacia cicatrizante (p < 0,05), con respecto al control
negativo, las observaciones histológicas, indican que la concentración al 110%
tiene mejor cicatrización.
Palavras chaves
Leucaena leucocephala ; Cicatrizante; Flavonoides
Introdução
La flora peruana presenta varias especies vegetales con actividad cicatrizante,
las cuales han sido estudiadas mediante diversos modelos experimentales.
La presencia de taninos, cumarinas, flavonoides y esteroides, son responsables
de la acción cicatrizante, astringente, antimicrobiana, antimicótica y
antiinflamatoria de las plantas que la poseen.
Leucaena leucocephala (Lam) de Wit. “Yaravisco”, es una planta que crece tanto
en la costa, sierra y selva de nuestro país, entre los 0 y 1500 msnm. Se ha
reportado su presencia en las regiones de Cuzco, Huánuco, Junín, Lambayeque,
Lima, Ica, Loreto, Pasco, San Martín, Tacna (Brako, L, Zarucchi 1993)
Leucaena leucocephala (Lam.) de Wit. “Yaravisco” presenta estudios previos de
actividad farmacológica y biológica, antioxidante. Asimismo, presenta
flavonoides, los cuales son reconocidos agentes antioxidante. Por otro lado, la
cicatrización de las heridas puede ser afectada adversamente por muchos
factores, tales como la presencia de agentes oxidantes, la inflamación y las
infecciones microbianas. (Benjaku et.al 2014).
(KUPPUSAMY et.al 2014) en un estudio diseñado para evaluar las actividades in
vitro del extracto acuoso de frutos de Leucaena leucocephala (Lam.) de Wit,
demostraron puede ser potencialmente usado como un adyuvante en el tratamiento
de diabetes mellitus.
Por ello de acuerdo a los antecedentes de Leucaena leucocephala (Lam.) de Wit.
“Yaravisco”, se evaluó en un modelo farmacológico sus posibles propiedades
cicatrizantes referidas a su uso popular ya que hasta el momento no existe
ningún reporte de estudio de actividad cicatrizante, el presente estudio
pretende también cubrir este vacío en su estudio a fin de poder validar su uso
tradicional, ya que es utilizada por los pobladores del valle de Santa de Cruz,
provincia de Palpa, región Ica, para la cicatrización de heridas en forma
externa.
Material e métodos
Las hojas de Leucaena leucocephala (Lam) de Wit. “Yaravisco” fue recolectado en
el distrito de Santa Cruz, Provincia de Palpa, Región Ica. Haciendo uso de la
herramienta Google Earth® se determinó su ubicación geográfica: 14 º 29’16.45” S
75 º 14’47.48” O elev. 535 m. Alt. Ojo 847 m.
La muestra vegetal seca se redujo a un tamaño apropiado con ayuda de un molino
manual, el extracto se obtuvo por maceración en etanol de 96º. A cabo de este
tiempo se filtró y se concentró a sequedad en evaporador rotatorio (Bucchi R
300), a una temperatura de 40ºC. Se determino el rendimiento del extracto en
porcentaje de peso/peso.
Se efectuó un tamizaje fitoquímico preliminar de acuerdo al esquema propuesto
por (LOCK 2016), con el fin de detectar los tipos de metabolitos secundarios
presentes. La identificación se realizó mediante reacciones de coloración y
precipitación.
Para evaluar la actividad cicatrizante se utilizaron ratones albinos machos, Mus
musculus cepa Balb/3/ CNPB, obtenidos del bioterio del Instituto Nacional de
Salud. se utilizó como método la medida de la resistencia a la tracción de la
herida en ratones (tensiómetro), (VAISBERG et.al, VILLEGAS et. al 1997 y
VÍLCHEZ-CÁCEDA et.al 2020). Para el ensayo biológico se utilizaron las
directrices para la manipulación de animales de experimentación de la directiva
2010/63/EU sobre el cuidado de los animales en el bioterio y las condiciones de
las buenas prácticas de laboratorios, según las guías para el manejo de animales
de laboratorio planteado en la Declaración de Helsinki (MANZINI 2000), Para
efectuar la eutanasia a los animales, previamente se les administró
pentobarbital sódico 5 mg/kg por vía intramuscular y posteriormente se procedió
a sacrificarlos por dislocación cervical. Asimismo, se realizó un posterior
estudio histológico con cortes longitudinales de la piel regenerada. Dichos
fragmentos fueron fijados en formol neutro al 10% y procesadas para su inclusión
en parafina. Las coloraciones se realizaron con hematoxilina - eosina para su
observación y evaluación histológica. (HERNÁNDEZ-PASTEUR et.al 2019).
Los resultados de los diferentes grupos experimentales de la actividad
farmacológica, se expresaron en promedios con su respectiva desviación estándar.
Para la contrastación de hipótesis se ha utilizado la prueba de Kruskal Wallis y
el test de Dunn como post-test. Para el análisis de datos se ha empleado el
programa SPSS v. 20.0 Windows. Se consideró como nivel de significación un
valor de p < 0,05.
Resultado e discussão
Como resultado del tamizaje fitoquímico se identificaron en la fracción A, D y E
flavonoides, grupos fenólicos en la fracción A y grupos amino primarios y
secundarios, triterpenos y/o esteroides en la fracción B, C y D, quinonas en la
fracción B, catequinas en la fracción E y leucoantocianidinas D y saponinas en
la fracción F.
La búsqueda de agentes con actividad cicatrizante ha adquirido singular
importancia en los últimos años, siendo la especie más representativa Croton
lechleri “Sangre de grado”.
La especie Leucaena leucocephala (Lam) de WIT. no presenta a la fecha
estudios de actividad cicatrizante, presentando estudios de otras actividades
biológicas (KUMAR et.al 2017).
Asimismo, especies de la familia Fabaceae, a la cual pertenece la especie
Leucaena leucocephala (Lam) DE WIT. como Senna reticulata (willd) H. Irwin &
Barneby (“Retama”), han de mostrado presentar actividad cicatrizante del
extracto etanólico de las hojas, debido a la presencia de dihidroxiisoflavonas,
trihidroxiisoflavonas y taninos, metabolitos encontrados en la especie en
estudio.
El estudio de actividad cicatrizante planteado en el presente trabajo, ha
sido realizado durante la fase inflamatoria de la cicatrización, donde se
produce un estrés oxidativo por la presencia de especies reactivas de oxígeno,
debido a la injuria producida por la incisión para producir la herida. Esto
produce retraso en el proceso de cicatrización de heridas, reducción en la
producción de colágeno entre otros. Es importante resaltar que tanto el extracto
etanolico a la concentración de 110% y 140% presentan producción de colágeno en
grado moderado, el extracto de 110% lo hace en mayor proporción. (grafico 1)
El estudio histológico, de la muestra tomada de la piel regenerada de los
ratones para las observaciones histológicas, tratada con la concentración de
110% tiene mejor cicatrización con respecto a las otras concentraciones de 140%
y 170%.
Gráfico 01 Actividad Cicatrizante de Leucaena leucocephala en ratones método de tensiómetro modelo de Vaisberg y col.
Tabla1. Estudio histológico de efecto cicatrizante extracto etanólico de Leucaena leucocephala en ratones método del tensiómetro. Muestra de la biopsi
Conclusões
La actividad cicatrizante de Leucaena leucocephala (Lam) DE WIT, podría deberse a
la presencia de flavonoides presentes en la planta, las cuales son capaces de
aumentar la disponibilidad de antioxidantes endógenos, así como la actividad de
enzimas antioxidantes. Por otro lado, sería conveniente que en estudios
posteriores se evalúen la actividad cicatrizante en diferentes condiciones,
evaluándola por ejemplo en otras fases de la cicatrización.
Agradecimentos
A la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional San Luis Gonzaga
Instituto de Investigación -Vicerrectorado de Investigación – Universidad Nacional
“San Luis Gonzaga".
Referências
BRAKO, L, ZARUCCHI, JL. Catalogue of the flowering plants and gymnosperms of Peru. St. Louis. Missouri Botanical Garden, 1993.
BENJAKU S, KITTIPHATTANABAWON P, SUMPAVAPOL P, MAQSOOD S. Antioxidant activities of lead (Leucaena leucocephala) seed as affected by extraction solvent, prior dechlorophyllisation and drying methods. J Food SciTechnol (November 2014) 51(11):3026–3037.
HASSAN RA, TAWFIK WA, ABOU-SETTA LM. The flavonoid constituents Of Leucaena Leucocephala. Growing in Egypt, and their Biological Activity. Biomedical Research 2017; 28 (7): 2893-2897.
HERNÁNDEZ-PASTEUR GRISELDA, SILVA-BERMÚDEZ PHAEDRA S., REYES-CHILPA RICARDO, VIBRANS HEIKE, SOTO-HERNÁNDEZ MARCOS. EVALUACIÓN in vitro DE LA ACTIVIDAD CICATRIZANTE Y ANTIBACTERIANA DE EXTRACTOS DE Buddleja cordata KUNTH Y Vismia baccifera (L.) TRIANA & PLANCH. Rev. fitotec. mex [revista en la Internet]. 2019 Jun [citado 2022 Ago 31] ; 42( 2 ): 93-99. Disponible en: http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0187-73802019000200093&lng=es. Epub 16-Ago-2019.
KUMAR N, CHAIYASUT CH. Health Promotion Potential of Vegetables Cultivated in Northern Thailand: A Preliminary Screening of Tannin and Flavonoid Contents, 5α-Reductase Inhibition, Astringent Activity, and Antioxidant Activities. Journal of Evidence-Based Complementary & Alternative Medicine 2017, Vol. 22(4) 573-579.
KUPPUSAMY UR, ARUMUGAM B, AZAMAN N,WAI CHJ. Leucaena leucocephala Fruit Aqueous Extract Stimulates Adipogenesis, Lipolysis, and Glucose Uptake in Primary Rat Adipocytes. The Scientific World Journal Volume 2014.
LOCK DE UGAZ O. Investigación fitoquímica: Métodos de estudios de productos naturales. 3ed. Lima: Editorial Pontificia Universidad Católica del Perú; 2016.
MANZINI JORGE LUIS. Declaración de Helsinki: Principios éticos para la investigación médica sobre sujetos humanos. Acta bioeth. [Internet]. 2000 Dic [citado 2022 Ago 30] ; 6( 2 ): 321-334. Disponible en: http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1726-569X2000000200010&lng=es. http://dx.doi.org/10.4067/S1726-569X2000000200010.
VÍLCHEZ-CÁCEDA H, INOCENTE-CAMONES M, FLORES-LÓPEZ O. Actividad cicatrizante de seis extractos hidroalcohólicos de plantas en heridas incisas de Rattus norvegicus albinus. Revista Cubana de Medicina Militar [Internet]. 2020 [citado 30 Ago 2022]; 49 (1):[aprox. 14 p.]. Disponible en: http://www.revmedmilitar.sld.cu/index.php/mil/article/view/489
VAISBERG J, MILLA M, PLANAS M, CÓRDOVA JL Y COL. Taspina is the cicatrizant principle in sangre de grado extracted from Croton lechleri. Planta Médica, 1989; 55(1):140 – 143
VILLEGAS LF, FERNÁNDEZ ID, MALDONADO H, TORRES R, ZAVALETA A, VAISBERG AJ, HAMMOND GB. Evaluation of the wound-healing activity of selected traditional medicinal plants from Perú. J Ethnopharmacol. 1997 Feb;55(3):193-200.
