Autores
Zat Schuviecerski, F. (UNILA) ; Rafagnin da Silva, M.L. (CENTRO UNIVERSITÁRIO DINÂMICA DAS CATARATAS) ; Wöhlke, J.L. (POLÍCIA FEDERAL) ; Augusto de Freitas, F. (POLÍCIA FEDERAL) ; Theodoro Toci, A. (UNILA)
Resumo
Devido ao grande número de apreensões efetuadas pela PF em Foz do Iguaçu de
medicamentos anabolizantes adquiridos de forma ilegal, este trabalho teve como
objetivo validar um método utilizando a CG-EM, para a quantificação de
anabolizantes oleosos contendo ésteres de drostanolona, trembolona, nandrolona ou
testosterona. Foram avaliados os parâmetros: Linearidade, homocedasticidade,
seletividade, precisão, efeito de matriz, LD, LQ e recuperação. Não foi observado
efeito de matriz e as curvas analíticas obtiveram boa linearidade na faixa de
concentração de 250 a 450 µg/ml. Os limites de detecção e quantificação variaram
de 67 a 95 µg/ml e 96 a 138 µg/ml, respectivamente. A recuperação também se
apresentou satisfatória para todos os analitos, variando de 86 a 98%.
Palavras chaves
Anabolizantes; Validação; Método
Introdução
Os anabolizantes ou hormônios esteroides anabólicos-androgênicos, são
medicamentos produzidos sinteticamente a partir da molécula de testosterona
(CUNHA et al., 2004). São utilizados por indicação médica para o tratamento de
vários problemas de saúde, porém são considerados entre as drogas de abuso mais
utilizadas por atletas, como forma de aprimorar a resposta muscular ou
rendimento atlético (KAHAL et al., 2020). Dessa forma, esse uso não terapêutico
incentiva a aquisição desses itens de forma clandestina e ilegal. Segundo o FDA,
entre 2016 a 2021, ocorreram 130 ações fiscalizadoras envolvendo produtos
falsificados adquiridos prioritariamente pela Internet (WHITE, 2022).
Os medicamentos obtidos de forma irregular, normalmente são adulterados, o que
passa a ser um grave problema de saúde pública. Medicamento falsificado, segundo
a Organização Mundial de Saúde, é aquele que deliberadamente e fraudulentamente
não respeita sua identidade, composição ou fonte, bem como pode conter o
princípio ativo correto em concentração divergente das especificações (WHO,
2018). Além disso, tendo em vista a ausência das devidas certificações, um
medicamento adulterado também pode conter impurezas e contaminantes (TIRCOVA;
BOSAKOVA; KOZLIK, 2019).
A partir do conhecimento técnico a respeito de desenvolvimento de técnicas
analíticas, este trabalho teve como objetivo validar uma metodologia
desenvolvida para a quantificação de cinco anabolizantes esteroidais presentes
em medicamentos anabolizantes oleosos apreendidos pela Delegacia de Polícia
Federal na região de Foz do Iguaçu/PR.
Material e métodos
Padrões
Os padrões de propionato de drostanolona liofilizado (TRC, Canadá), 19-
nortestoterona-17-decanoato, acetato de trembolona, propionato de testosterona e
sibutramina (PI) adquiridos na forma de pó liofilizado foram utilizados (DR
EHRENSTORFER). Utilizou-se como solvente a mistura acetonitrila:acetato de etila
1:1 grau HLPC. Uma mistura de anabolizantes oleosos que foi analisada
previamente e demonstrou não conter princípios ativos, foi utilizada para o
efeito de matriz.
Validação do método
O presente estudo foi realizado com base nas diretrizes de validação de métodos
analíticos descritas pelo Inmetro através do DOQ-CGCRE-008 – Revisão 09
(INMETRO, 2020), por meio da descrição dos seguintes parâmetros de desempenho:
Linearidade (faixa de trabalho); homocedasticidade; seletividade; limite de
detecção (LD); limite de quantificação (LQ); recuperação e efeito de matriz.
Para determinação e cálculo de parâmetros de validação foi utilizada a planilha
de validação de métodos analíticos proposta por RIBEIRO e FERREIRA (2008).
Análise cromatográfica
Na análise dos anabolizantes foi utilizado o equipamento CG System (7890ª)
acoplado ao espectrômetro (Inert XL MSD with Triple-Axis Detector modelo 5975C)
com injetor automático (Agilent Technologies). A separação dos anabolizantes
ocorreu em coluna HP-5MS 5% Phenyl Methyl Silox (30 m x 0,25 mm x 0,25 μm). O
gás Hélio foi empregado como gás de arraste, fluxo de 0,8 ml/minutos; 1,0 µl de
amosta. Ramapa de eluição: 60ºC a 40ºC/min. até 150ºC/min, 4ºC/minuto até
325ºC. Modo SIM: Nandrolona 110 m/z; drostanolona 149 m/z; testosterona 124 m/z;
trembolona 141 m/z.
Resultado e discussão
A linearidade foi avaliada tanto pela correlação linear, onde obteve-se valores
superiores a 0,9800, quanto pelo gráfico de resíduos, onde todas as curvas
apresentaram homocedasticidade (INMETRO, 2020; SCIENTIFIC WORKING GROUP FOR
FORENSIC TOXICOLOGY (SWGTOX), 2013).
O método demonstrou-se bastante preciso dentro dos níveis das curvas analíticas
variando de 1 a 7% para a nandrolona, 0,8 a 10% para a drostanolona, 0,3 a 3%
para a testosterona e 0,5 a 4% trembolona. A seletividade do método foi
determinada utilizando-se o modo de aquisição SIM no espectrômetro de massas
(Tabela 1), resultado semelhante ao descrito por Mazzarino et al (2017) e Neves
e Caldas (2017). Comparando-se a inclinações das curvas realizadas no solvente e
na amostra não foi observado efeito de matriz, assim como Neves e Caldas (2017).
A recuperação foi avaliada utilizando-se três pontos de concentração dos padrões
analíticos, 50, 300, 500 µg/ml (Tabela 1). Para os níveis de 300 e 500 µg/ml a
recuperação variou de 86 a 99%, níveis bem próximos aos preconizados pelo
INMETRO que defini uma variação de 90 a 107%. Para o nível de 50 µg/ml somente o
acetato de trembolona (100%) ficou na faixa estabelecida para este nível de
concentração, que varia de 80 a 110%. A recuperação será refeita para os demais
anabolizantes.
Os limites de detecção e quantificação, calculados a partir da curva analítica,
variaram de 67 a 95 µg/ml e 96 a 138 µg/ml, respectivamente (Tabela 1). Estes
níveis estão excelentes para as análises, tendo em vista a concentração de
anabolizantes nas amostras (mg/mL). Os valores de LQ foram menores aos descritos
por Neves e Caldas (2017). No entanto, Pellegrini et al. (2012) obteve menores
limites de quantificação.
Parâmetros analíticos de validação
Conclusões
Os resultados obtidos demonstraram que o método desenvolvido possui segurança
analítica para ser aplicado nas análises de rotina apresentando linearidade,
seletividade e recuperação de acordo com os parâmetros determinados pelo INMETRO
(INMETRO, 2020). A metodologia validada apresentou níveis de quantificação e de
detecção inferiores ao menor ponto da curva de calibração para todos os padrões
analisados. Além disso, a técnica proposta produz um método quantitativo composto
de extração simples, sem necessidade de derivatização das amostras, tornando o
preparo mais rápido e simples.
Agradecimentos
Os autores agradecem ao Programa de Auxílio à Integração ao Pesquisador da UNILA
(Edital n° 80/2019/PRPPG), bem como à Delegacia Regional de Polícia Federal de Foz
do Iguaçu/PR pela celebração do Acordo de Cooperação Técnica.
Referências
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