ANÁLISE EXPERIMENTAL DE ATIVIDADE LIPOLÍTICA NA FRUTA CARAMBOLA (Averrhoa Carambola)

ISBN 978-85-85905-25-5

Área

Bioquímica e Biotecnologia

Autores

Rosa, C.M.C. (UEPA) ; Figueiredo, R.O. (UEPA) ; Valente, W.W.R. (UEPA) ; Almeida, N.C. (UEPA) ; Silva, N.R. (UEPA) ; Carneiro, J.S. (UEPA)

Resumo

As lipases são biocatalisadores que atuam em extratos gordurosos. Com aplicações na produção aromatizantes artificiais para alimentos e realizando biorremediação de efluentes, esta enzima pode ser obtida através de matrizes vegetais. As analises realizadas neste trabalho propõe identificar vegetais com ocorrência nacional, em virtude das grandes reservas naturais brasileiras. A espécie vegetal avaliada foi a Carambola (Averrhoa Carambola L.), utilizando a polpa para obtenção dos extratos. Constatou-se atividade enzimática de lipolítica na fruta,avaliando o desempenho da enzima provocando alterações no tempo de extração e pH do sistema. O referido trabalho dispõe-se a fazer contribuições para promover recursos biotecnológicos a partir dos dados observados.

Palavras chaves

Lipases; Biotecnologia; Vegetais

Introdução

A lipase é definida como uma substância com função catalisadora, pertencente ao grupo de enzimas hidrolases, atuando em reações de hidrólise, esterificação, interesterificação e transesterificação de extratos contendo ésteres glicerídeos, produzindo ácidos graxos livres. Através das lipases obtêm-se contribuições intrínsecas na indústria alimentícia e farmacêutica atribuindo aromas naturais aos produtos usando ésteres. Além disso, a lipase pode ser utilizada em tratamento de efluentes e em diagnósticos de doenças como a Pancreatite Aguda, enfermidade que provoca inflamação do pâncreas (MENDES, 2005; HASAN et al, 2005). No Brasil, estima-se que exista cerca de 43 mil espécies (Brasil. MMA, 2006), dessa forma, infere-se que exista fontes ricas em lipases. Assim como propõe análises realizadas por Delgado (2014) que analisou a polpa da laranja sob as condições de 25°c e pH 7, no qual avaliou-se atividade lipásica de 14,2 U/mL. Tal como seguiu suas analises avaliando a influência do pH na manipulação da fruta, constatando- se melhor atividade no pH 6 com valor de 43,7 U/mL em temperatura de 25°c. Há outros frutos que podem apresentar reservas de lipases, como a Carambola (Averrhoa Carambola). Apesar de ser oriunda do continente asiático, ela possui ocorrência em países tropicais (OLIVEIRA, 2007). Esta matriz pode fornecer eficácia no processo industrial pela acessibilidade de matéria prima e facilidade nos métodos de extração. Com isso, o presente trabalho propõe-se analisar a fruta Carambola (Averrhoa Carambola), investigando a possível presença de atividade lipásica, indicando o melhor tempo de extração enzimática e pH, para que a enzima não seja desnaturada. Contribuindo para o desenvolvimento de novos recursos biotecnológicos e para o estudo da enzima.

Material e métodos

O extrato utilizado foi obtido a partir da fruta Carambola (Averrhoa Carambola), retirado diretamente da árvore e levado para o laboratório de química da Universidade do Estado do Pará (UEPA). A fruta foi esterilizada com água corrente, sabão liquido e água destilada. Após a lavagem da fruta, ela foi cortada com auxílio de uma lâmina e pressionada manualmente para extração do suco concentrado presente na polpa. Para a referida avaliação, utilizou-se os métodos propostos por Lopes et al (2011) com adaptações. O extrato concentrado foi fracionado em erlenneyers e adicionado em cada porção 2 mL de solução tampão fosfato 0,1M, 5 mL de óleo de soja (substrato) e 1 mL de glicerina (agente emulsificante). Após isso, foi adicionado 2 gotas de fenolftaleína nas amostras e em seguida títuladas com solução de Hidróxido de Sódio 0,1M. O parâmetro avaliativo parte da reação de neutralização dos ácidos graxos produzidos na hidrólise enzimática e a solução NaOH 0,1M, inferindo que o volume gasto na bureta seja o valor correspondente ao volume de ácido. A atividade lipásica é definida como um u/mol de enzima bruta utilizada para liberar 1 U/ml de ácido graxo. Os volumes de cada amostra foram calculados e convertidos em atividade relativa, como sugerido por setuval (2016).No intuito de encontrar o melhor tempo de extração enzimática, as frações foram adicionadas em solução tampão fosfato em tempos distintos. Após identificar o tempo de maior extração lipásica, partindo deste intervalo, outras amostras foram submetidas a mudanças no pH para identificar a faixa ideal de atuação das lipases. Os dados obtidos através das análises foram interpretados por meio de gráficos produzidos pelo software Microsoft Excel (2016).

Resultado e discussão

Os resultados obtidos, de modo geral, apresentaram atividade relativa para a fruta Carambola. Avaliando o melhor tempo de extração em pH 7,0 e temperatura de 25ºC, a atividade lipásica referente ao fruto da carambola foi expressa pela Figura 01. Consta-se o melhor tempo em 5 e 10 minutos para atividade de 3,50 U/mL e 2,40 U/mL, respectivamente. De 15 a 40 minutos as atividades ficaram abaixo de 1 U/mL, exceto em 25 e 30 minutos. A análise descrita por Delgado et al. (2014) nas polpas de Maracujá-azedo-amarelo (Passiflora edulis S.), Manga Tommy Atkins (Mangifera indica L.) e Laranja Pêra (Citrus sinensis L.) apresentaram resultados superiores nos valores de 28,9 U/g, 27,2 U/g e 14,2 U/g. Na identificação da melhor atividade relativa nos extratos da polpa com variação de pH, foi observado maior atividade lipásica entre 4 e 5, com valor de 5 U/mL. A atividade decresceu conforme o aumento do pH do ambiente, expresado pela figura 02. Em comparação aos resultados obtidos no estudo feito por Delgado (2014) nos subprodutos da laranja frit, bagaço e casca em temperatura de 40ºC. Os valores são superiores com 46,8 U/mL em pH 9,0, o bagaço apresentou em pH 6,0 atividade de 43,7 U/mL e a casca no pH 7,0 com 57,6 U/mL.

Avaliando o tempo de extração enzimática.

Conclusões

Considerando as amostras na análise da Carambola (Averrhoa Carambola), pode-se afirmar que o melhor tempo de extração é em 5 minutos, produzindo 3,5 U/mL de atividade enzimática. Nas amostras referentes ao pH, foi constatado que a lipase presente na Carambola desempenha melhor atividade em pH ácido (Entre 4 e 5 na escala), considerando atividade de 5 U/mL. O referido trabalho serviu para gerar recursos biotecnológicos, afim de proporcionar contribuições significativas para a área acerca de métodos e analises experimentais dos compostos enzimáticos.

Agradecimentos

Agradecemos a Universidade do Estado do Pará e a Fundação Amazônia de Amparo a Estudos e Pesquisa (FAPESPA) pela concessão de bolsa referente ao PIBIC/UEPa, incentivando o desenvolvimento deste trabalho.

Referências

DELGADO, C. H. O. Obtenção, caracterização e aplicação de lipases vegetais: Utilizando Subprodutos do Processamento de Laranja e Manga para Suco. Universidade Estadual Paulista, 2014.

DONADIO, L. C., SILVA, J. A. A., ARAÚJO, P. S. R., PRADO, R. M. Caramboleira (Averrhoa Carambola L). Séries Frutas Potenciais. Jaboticabal: Sociedade Brasileira de Fruticultura. 81 p. 2001.

HASAN, F.; SHAH, A. A.; HAMEED, A. Industrial Applications Of Microbial lipases. Enzyme and Microbial Technology, New York, v.39, n.2, p.235-251, 2006.

LOPES, D. B., FRAGA, L. P., FLEURI, L. F., MACEDO, G. A.; Lipase and Esterase - to What Extent Can This Classification Be Applied Accurately? Ciência e Tecnologia de Alimentos, 2011.

MENDES, A. Aguiar; CASTRO, H. Ferreira; PEREIRA, E. Benedito; JÚNIOR, A. Furigo. Aplicação de Lipases no Tratamento de Água Residuárias Com Elevados Teores de Lipídeos. Química nova. Rio de janeiro, v. 28, n.2, p.296-305, 2005.

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SETUVAL, L. G. Produção de Lipase Utilizando Subprodutos do Coco Babaçu. Universidade Federal do Maranhão, 2016.