ANÁLISE POR HPLC E ESPECTROSCOPIA DE MASSAS DE ALCALÓIDE PRESENTE NO EXTRATO ALCALOÍDICO HEXÂNICO DAS FOLHAS DA GRAVIOLEIRA, UMA PLANTA DA AMAZÔNIA

ISBN 978-85-85905-25-5

Área

Química Orgânica

Autores

Sodré Figueiredo, G. (UFPA) ; L dos Anjos, M. (UFPA) ; Rodrigues Bitencourt, H. (UFPA) ; P S Souza Filho, A. (EMBRAPA) ; L Almeida, L. (UFPA) ; R Souza Pina, J. (UFPA) ; M do Rosário Marinho, A. (UFPA) ; J de Almeida Maciel, C. (UFPA) ; Menezes Siqueira Rodrigues, S. (UFPA) ; Ciriaco Pinheiro, J. (UFPA)

Resumo

A gravioleira, uma planta frutífera da região amazônica, muito apreciada pelo seu fruto, a graviola, utilizado na fabricação de sucos e sorvetes. Comum na região Amazônica e bastante estudada devido aos seus componentes químicos, alcalóides e acetogeninas, principalmente. Devido a esses fatos, neste trabalho relata-se a análise via HPLC e Espectrometria de massas do extrato alcaloídico obtido a partir do extrato hexânico das folhas.

Palavras chaves

Alcalóide; anonaina; aporfina

Introdução

Annona muricata, popularmente conhecida como gravioleira, uma planta frutífera da região amazônica, muito apreciada pelo seu fruto, a graviola, utilizado na fabricação de sucos e sorvetes. Pertence à família da Anonaceas, comum na região Amazônica e bastante estudada devido aos seus componentes químicos, acetogeninas e alcalóides isoquinolinícos. As acetogeninas possuem uma gama de atividade citotóxica in vitro contra células cancerígenas, de leucemia, câncer do colo do útero, melanoma, câncer de ovário, câncer renal, entre outras atividades, como é o caso da bulatacin, isolada de Annona bullata (HUI et al., 1989). Bem como, do extrato etanólico da gravioleira, rico dessas substâncias, que apresentou atividade leishmanicida e citotóxica (JARAMILLOA et al., 2000). Com relação aos alcalóides, podem-se cita os do tipo aporfínicos, oxoaporfínicos e os tetrahidroprotoberberínico, todos do tipo isoquinolínicos, que apresentam atividades antimicrobiológicas, anticancerígenas, antifúngicas (DE LIMA et al., 2012), entre outras. Vários alcalóides foram isolados de A. muricata (MATSUSHIGE et al., 2012).

Material e métodos

Utilizou-se um Espectrômetro de massas Waters Acquity TQD e Cromatográfo da linha Alliance e2695, os reagentes utilizados foram Aldrich, Vetec ou Nuclear, todos PA. O desenvolvimento do método foi realizado em cromatografo da linha Alliance e2695, com um sistema de bomba binário e injetor automático acoplado a um detector de UV/Vis com arranjo de diodo abrangendo. A fase estacionária foi uma coluna de fase reversa Sunfire C18, com coluna de guarda Sunfire C18 e fluxo de 1mL/min em forno termostático a 40 ºC. A fase móvel constitui-se de uma mistura binária de água ultra pura e MeOH filtrado em gradiente exploratório linear. A amostra foi injetada com um volume de 20 µL. Foram coletadas folhas verdes de uma plantação e foram secas em local arejado ao abrigo da luz à temperatura de 40ºC. O extrato Hexânico das Folhas foi obtido a partir do material botânico triturado e seco, que foi colocado em um recipiente de vidro com tampa e encoberto com hexano, durante 48hs. A solução hexânica obtida, foi filtrada e evaporada, fornecendo um semi-sólido de massa igual à 9,8g. Extrato Alcaloídico das Folhas: o resíduo 1, obtido da solução hexânica foi dissolvido em CH2Cl2 e submetido a partição em ampola de decantação de 250 mL, com solução de ácido cítrico 5%, três vezes, para obtenção da solução ácida, com os alcalóides. A solução diclorometânica foi lavada com água destilada e secada com Na2SO4 anidro, filtrada e evaporada, fornecendo um resíduo 2 de massa igual à 0,5g. A solução ácida coletada, foi basificada com NH4OH PA e submetida a extração novamente com CH2Cl2 PA em ampola de decantação de 250 mL, três vezes, para obtenção da solução diclorometânica contendo os alcaloides e que foi lavada com água destilada e secada com Na2SO4 anidro, filtrada e evaporada.

Resultado e discussão

O extrato alcaloídico obtido foi analisado via HPLC e foi verificada a presença de dois picos A (100%) e B (30%), ambos com uma absorção na região do ultravioleta de comprimento de onda igual a 239nm. Indicando tratar-se de um sistema insaturado. O scan feito pelo Espectro de massas do extrato alcaloídico, indicou a presença de apenas um constituinte principal. Com m/z igual a 265,3. Com base nessas informações e verificando a literatura, pode-se propor que o alcalóide em questão é a anonaina (mm 265g/mol; C17H15NO2). Pelo espectro de massas pode-se então verificar os demais fragmentos relativos aos íons negativos obtidos pela quebra da molécula, comum neste tipo de método.

Conclusões

O método de análise de HPLC em questão, demonstrou ser bastante eficiente, pelos dados obtidos, sem a necessidade de se fazer colunas de cromatografia clássica, bem como a espectrometria de massas, devido proporcionar a massa molar e os fragmentos da substância presente, indicando tratar-se do alcalóide anonaina, substância já relatada na literatura para está espécie.

Agradecimentos

Primeiramente agradecer a instituição Universidade Federal do Pará e a EMBRAPA e aos alunos e professores envolvidos.

Referências

DE LIMA, J. P. S.; PINHEIRO, M. L. B.; SANTOS, A. M. G.; PEREIRA, J. L. S.; SANTOS, D. M. F.; BARISON, A.; SILVA-JARDIM, I.; COSTA, E. V. In Vitro Atileishmanial and Cytotoxic Activities of Annona mucosa (Annonaceae). Rev. Virtual Quim, v. 4. nº 6, p. 692-702, 2012.

HUI, Y.-H.; RUPPPRETCHT, J. K.; LIU, Y. M.; ANDERSON, J. E.; SMITH, D. L.; CHANG, C.-J.; MCLAUGHLIN, J. L. Bullatacin and Bullatacinone: two Highly potent bioactive Acetogenins from Annona Bullata. J. Nat. Prod. v. 52, nº 3, p. 463-477, 1989.

JARAMILLOA, M. C.; ARANGOA, G.J.; GONZ´ALEZB U, M.C.;, ROBLEDOC, S.M.; VELEZ, I.D. Cytotoxicity and antileishmanial activity of Annona muricata pericarp. Fitoterapia. v. 71, p. 183-186. 2000.

MATSUSHIGE, A.; KOTAKE, Y.; MATSUNAMI, K.; OTSUKA, H.; OHTA, S.; and TAKEDA, Y.; Annonamine, a New Aporphine Alkaloid from the Leaves of Annona
Muricata. Chem. Pharm. Bull. v. 60, nº 2, p. 257—259, 2012.