Atividade antimicrobiana e modulação do 5-Hidroxi-3,7,4’-trimetoxiflavona isolada das folhas de Vitex gardneriana Schauer

ISBN 978-85-85905-23-1

Área

Produtos Naturais

Autores

Teixeira da Silva, P. (UVA) ; Macedo, I. (URCA) ; Parcelli Costa do Vale, J. (UVA) ; Hermínio da Silva, J. (URCA) ; Gonçalves Cruz, B. (URCA) ; Douglas Melo Coutinho, H. (URCA) ; Magno Rodrigues Teixeira, A. (URCA) ; Braz-filho, R. (UENF) ; Silva dos Santos, H. (UVA)

Resumo

O uso de substâncias naturais para a modulação da resistência bacteriana a antibióticos, mostra-se uma alternativa bastante promissora (ALENCAR, 2015). Vitex gardneriana é conhecida popularmente como “Jaramataia” e utilizada pela população para diversas patologias, tais como: gripe, verminoses, dores abdominais e distúrbios inflamatórios (MONTEIRO, 2015). Assim o objetivo deste estudo foi avaliar a atividade antimicrobiana e moduladora da 5-Hidroxi-3,7,4’-trimetoxiflavona isolada das folhas de V. gardneriana. Os resultados demonstram que a flavona demonstrou inibir o crescimento bacteriano na concentração menor ou igual a 512 μg/mL e apresentou ação sinérgica quando combinada com os antibióticos norfloxacino e gentamicina. Assim, a flavona demonstrou ser um promissor agente antimicrobiano

Palavras chaves

Vitex Gardneriana; flavona; atividade antimicrobiana

Introdução

Plantas medicinais tem se tornado uma promissora alternativa para o tratamento único e/ou conjugado de patologias como a resistência bacteriana, o que pode ser observado no uso de extratos vegetais no combate e controle de infecções por microorganismos. (ALVES, 2014). Nesta perspectiva, o uso de substâncias naturais para a modulação da resistência bacteriana a antibióticos, mostra-se uma alternativa para fármacos já consagrados, que não mais obtém eficácia no tratamento de infecções bacterianas (ALENCAR, 2015). O risco do aumento de cepas resistentes, atrelada à baixa quantidade de medicamentos efetivos disponíveis, traz às pesquisas uma necessidade urgente de novos compostos, já que a OMS (Organização Mundial da Saúde) reconheceu a Resistência Antimicrobiana como uma problemática de saúde pública mundial (PAIM, 2014). Segundo Alencar (2015), a terapêutica combinada de produtos naturais com antibióticos resultam na diminuição de mudanças ocasionadas no sítio ativo do fármaco, o aumento da permeabilidade da membrana extra-celular, inativação ou diminuição da atividade das bombas de efluxo, impedindo a inibição de antibióticos pela degradação enzimática. Assim, os metabólitos secundários, presentes nos extratos vegetais, são uma alternativa viável ao tratamento de infecções contra cepas multirresistentes. A espécie V. gardneriana, conhecida popularmente como “Jaramataia”, é utilizada pela população para diversas patologias, tais como: gripe, verminoses, dores abdominais, inflamação prostática, dor óssea, problemas renais, dor na coluna, dentre outros distúrbios inflamatórios (MONTEIRO, 2015).

Material e métodos

As linhagens bacterianas utilizadas foram: E. coli (EC¬-ATCC10536 e EC27) e S. aureus (SA-ATCC25923 e SA358). Todas as linhagens foram mantidas em Agar infusão de coração (HIA, Difco Laboratories Ltda.). Antes da realização dos ensaios, as linhagens foram cultivadas por 18h a 37ºC em caldo infusão de cérebro e coração (BHI, Difco Laboratories Ltda.). Vitex gardneriana foi coletada em abril de 2014 na fazenda experimental da Universidade Estadual do Vale do Acaraú, localizada a 11 km da cidade de Sobral, Ceará, Brasil. A autenticação da planta foi realizada pelo professor Elnatan Bezerra de Souza e um exemplar de comprovante (N ° 17.703) foi depositado no herbário Francisco José de Abreu Matos (Sobral, Brasil). As cromatografias de adsorção em coluna foram feitas em gel de sílica 60 (63-200 m, 70-230 mesh, Vetec). O comprimento e diâmetro das colunas variaram de acordo com a quantidade de amostra a ser submetida à cromatografia. Nas cromatografias em camada delgada (CCD) foram utilizadas cromatofolhas de alumínio TLC 20 x 20 cm com gel de sílica 60 GF254 (Merck) . As revelações das substâncias nas cromatoplacas analíticas foram realizadas, através da exposição destas, com solução de vanilina, seguida de aquecimento. Os espectros de Ressonância Magnética Nuclear uni e bidimensionais, foram obtidos em espectrômetro Bruker DRX-300 e DPX-500 (1H: 300 e 500 MHz; 13C: 75 e 125 MHz), utilizando CDCl3 como solvente e TMS como padrão interno.

Resultado e discussão

VG.EF.CLII foi isolado como um sólido verde. O sinal em δH 12,70 no espectro de RMN de 1H referente a um hidrogênio da hidroxila quelado e o sinal em δC 178,98 no espectro de RMN de 13C são consistentes com o esqueleto de uma 5-hidroxiflavona. Ainda foi possível observar no espectro de RMN de 1H (Tabela 1) cinco sinais de em δH 8,01 (d, J = 8,6 Hz, H-2’/6’), 7,05 (d, J = 8,6 Hz, H-3’/5’), 6,39 (s) (H-6) e 6,48 (s) (H-8). Esses dados espectrais estão de acordo com uma flavona 5,3,7,4-substituída. Adicionalmente, observaram-se três sinais em δH 3,90 (MeO-7), δH 3,91 (MeO-3) e 3,94 (MeO-4’). O espectro de RMN de 13C mostrou sinais para os grupos metoxila em δC 55,63 (MeO-4’), 55,99 (MeO-7) e 60,33 (MeO-3). O sinal a δC 178,98 (C-4) é compatível com uma carbonila conjugada de um núcleo flavonoidico. Os dados acima permitiram identificar o composto isolado como sendo a 5-Hidroxi-3,7,4'-trimetoxiflavona (Figura 1), que está sendo relatada pela primeira vez no gênero Vitex. A flavona VG.EF.CLII apresentou concentração inibitória mínima (CIM) frente às cepas bacterianas multirresistentes, menor ou igual a 512 μg/mL. O referido resultado demonstra que este valor é relevante do ponto de vista clínico, já que será modulado a antibióticos padrões os quais possuem CIM congruentes com este resultado. A Figura 1, mostra as diferentes condições de modulações de antibióticos com VG.EF.CLII frente à cepas multirresistentes de Staphylococcus aureus e Escherichia coli. O efeito sinérgico da Norfloxacina com a flavona foi nítido para as duas linhagens de cepas multirresistentes, este fato é notório, quando observamos a concentração inibitória mínima (MIC), ser reduzido, quanto à junção do antibiótico ao extrato vegetal. Resultado semelhante pode-se observar na modulação com a gentamicina

Dados espectroscópicos de RMN para 5-Hidroxi-3,7,4'-trimetoxiflavona (1H: 500 MHz; 13C: 125 MHz; em CDCl3)


Concentração Inibitória Mínima dos aminoglicosídeos na presença e na ausência da substância VG.EF.CLII

Conclusões

O estudo fitoquímico das folhas de V. gardneriana permitio o isolamento do composto 5-Hidroxi-3,7,4’-trimetoxiflavona, o qual demonstrou inibir o crescimento bacteriano na concentração menor ou igual a 512 μg/mL. Tendo em vista este resultado inicial, os testes posteriores comprovaram a eficiência deste, uma vez que na modulação de duas classes distintas de antibióticos norfloxacino e gentamicina apresentou ação sinérgica. Assim, a modulação de substância isoladas com os antibióticos promoveu uma ação sinérgica.

Agradecimentos

A CAPES, CNPq e FUNCAP pelo apoio financeiro.

Referências

ALENCAR, L.C.B; CHAVES, T.P.C.; SANTOS, J.S.; Efeito modulador do extrato de plantas medicinais do gênero Spondias sobre a resistência de cepas de Staphylococcus aureus à Eritromicina. Revista Ciência Farmacêutica Básica e Aplicada. 2015; 36(1):111-116.

ALVES, E.F; SANTOS, B.S; MATIAS, E.F.F.; Avaliação da atividade antibacteriana e modulatória da fração hexânica do extrato hexânico de Cordia verbenacea DC. Revista Interfaces: Saúde, Humanas e Tecnologia. 2014; 2(5).

MONTEIRO, L.C.C. F.; OLIVEIRA, A. M. S.; ALVES, L. A. Atividade antioxidante, teor de fenóis e atividade larvicida frente ao aedes aegypti de Vitex gardneriana Schauer. Bluecher Chemmistry Proceedings. 2015; 3(1).

PAIM, R.S.P.; LORENZINI, E.; Estratégias para prevenção da resistência bacteriana: contribuições para a segurança do paciente. Revista Cuidarte. 2014. 5(2): 757-64.