Fungos Endofiticos da Caatinga: caracterização química e atividade anticolinesterasica

ISBN 978-85-85905-23-1

Área

Produtos Naturais

Autores

Ribeiro Alves, D. (UNIVERSIDADE ESTADUAL DO CEARÁ) ; Carolina Silva e Silva, A. (UNIVERSIDADE ESTADUAL DO CEARÁ) ; das Chagas de Oliveira Freire, F. (EMBRAPA) ; Roger Vasconcelos, F. (UFC) ; Maia de Morais, S. (UNIVERSIDADE ESTADUAL DO CEARÁ)

Resumo

Fungos endofíticos têm se mostrado como produtores de compostos com atividade biológica. A biodiversidade da Caatinga vem se caracterizando como fonte promissora de metabólitos bioativos com potencial ação contra a Doença de Alzheimer. Neste sentido, este trabalho visa contribuir para a descoberta de produtos que apresentem atividade antiacetilcolinesterase, a partir de fungos endofíticos obtidos de sementes de pinhão-manso. Para tanto foi avaliado o perfil químico dos extratos acetato de etila obtidos dos fungos Emericella nidulans, Vermisporium e Dichotophtora sp. e sua atividade antiacetilcolinesterase quantitativa pelo ensaio ELISA numa leitora de microplacas. Portanto este trabalho ressalta a utilização de fungos para obtenção de compostos bioativos potencias na luta contra Alzheimer

Palavras chaves

fungos endofiticos; antiacetilcolinesterase; FTIR

Introdução

Fungos são grandes produtores de metabólitos secundários (Specian, 2014 e TAN; ZOU, 2001). Fungos endofíticos vem ganhando destaque entre os pesquisadores (TAN; ZOU, 2001), pois estão presentes em tecidos vegetais sadios, sem causar danos aos hospedeiros, com uma infecção geralmente despercebida (FREIRE; GONÇALVES 2012 e Canuto et al, 2012). Diversos trabalhos determinam uma ampla área de aplicação dos metabólicos secundários extraídos de fungos endofílicos, atuando com relevância na atividade antimicrobiana e antileishmanial (ALVES, 2018; SILVA, 2010; SOUZA, 2004;PIRES, 2015;TAKAHASHI, 2008). Dentre os microrganismos que acumulam substâncias antifúngicas, fungos e leveduras destacam-se pela quantidade de produtos farmacêuticos de uso corrente na medicina (CAFÊU, 2015; PRINCE, 2008), entre outras aplicações de seus compostos bioativos (CANUTO et al 2012). A doença de Alzheimer é uma patologia neurodegenerativa associada à idade avançada, cujas manifestações resultam em uma deficiência progressiva e uma incapacitação (SERENIK, 2008). Pacientes diagnosticados com Alzheimer apresentam altas concentrações de acetilcolinesterase (AChE), enzima responsável por hidrolisar o neurotransmissor acetilcolina possibilitando o impulso nervoso (MOTA, 2012). Um relevante número de pesquisar vem avaliando a ação de produtos naturais na inibição da enzima AChE (MARTINS, 2018; ZANARDI, 2012; MOTA, 2008). Este trabalho descreve a atuação de metabolitos secundários extraídos de fungos endofílicos isolados das sementes frescas de pinhão-manso (Jatropha curcas L.), Emericella nidulans, Vermisporium-like e duas espécies de Dichotophtora sp., na atividade inibitória frente a enzima AChE e a elucidação de classes de compostos por espectroscopia na região do infravermelho (FT-IR).

Material e métodos

Sementes frescas de J. curcas foram adquiridas em Beckman seeds®, Fortaleza, no estado do Ceará. As sementes passaram por um processo de esterilização na superfície durante 1 min com etanol 70%, lavadas com água destilada e secas usando papel filtro esterilizado. 5 sementes com ou sem Desinfestação total foi adicionada a 30 placas de Agar de Dextrose de Batata (PDA). Permaneceram incubadas por três dias a 25°C como fotoperíodo de 12 horas. Após esse processo foram isoladas cepas de Vermisporium-like e Emericella nidulans identificadas por morfologia de esporos e submetidas à coleção de microrganismos da EMBRAPA (CMIAT) sob nº 232 e 233, respectivamente. Dichotomophtora boerhaaviae (235) foi obtida da CMIAT e linhagens de D. portulacae (CBS149.94) foram obtidas da CBS Fungal Biodiversity Center e depositadas na CMIAT (234). Após isolamento, os fungos foram inoculados no meio de cultivo líquido (BD), após crescimento separou-se o caldo dos micélios por filtração e realizada partição liquido/liquido do solvente acetato de etila com o caldo. Posteriormente o solvente foi rotaevaporado, obtendo-se os extratos 232 (Emericella nidulans), 233 (Vermisporium), 234 (D. portulacae) e 235 (D. boerhaaviae). Os espectros na região do infravermelho foram obtidos utilizando um espectrofotômetro modelo Nicolet iS5 da Thermo Scientific. As amostras foram preparadas na forma de pastilhas de KBr na proporção 1:20 (m/m) e os espectros registrados no intervalo de 4000 a 400 cm-1, empregando-se 32 scans e resolução de 4 cm-1. A atividade de inibição de AChE medido quantitativamente usando a metodologia Elisa num leitor de microplacas BIOTEK (modelo ELX 800 com software Gen5 V2.04.11), baseado no método de Ellman (1961) e modificado por Trevisan (2003).

Resultado e discussão

Os extratos acetato de etila 233 e 235 apresentaram melhor atividade anticolinesterásica, podendo ser comparada ao padrão, visto que trabalhos anteriores que utilizaram substâncias isoladas de fungos endofíticos apresentaram valores equivalentes (CHAPLA, 2012), ressaltando a importância dos resultados aqui apresentados com extratos. Os trabalhos de Alves et al. (2017, 2018), Tomiotto-pellisier et al. (2018), Martins et al (2018) e Penido et al. (2017) corrobora com nossos resultados e demonstra a importância e a correlação da atividade antiacetilcolinesterase para determinação de possíveis bioativos de membrana para atividades antileishmaniais, antifúngicas, antibacterianas, bem como no possível aditivo fitoterápico para a Doença de Alzheimer. Os espectros FT-IR foram identificados tendo como referência os trabalhos Lecellier (2014), Singhal (2016) e Pavia (2010), que determinaram a presença de: alongamentos de O-H e ou N-H (3380 cm-1 a 3421 cm-1), deformação assimétrica e simétrica de grupos CH3 e CH2 (2925 cm-1 e 2855 cm-1), alongamento simétrico C=O, normalmente encontrado em ésteres (1766 cm-1), C=O de ácidos carboxílicos ou cetonas (1710cm-1), bandas que são associadas ao dobramento de aminas primarias e secundárias (1640 cm-1 a 1540 cm-1), estiramentos C-N ou C-O de éster (1267 cm-1 a 1395 cm-1), presença de estiramento simétrico C-O-C, C-O (1098 cm-1 a 1192 cm-1), estiramento C-O de álcoois primários (1030 cm-1), e a deformação C-H normalmente encontrada em grupos aromáticos (826 cm-1 a 895 cm-1), como mostra a Figura1 e 2.

Espectros de infravermelho em espectrofotômetro modelo Nicolet iS5 da Thermo Scientific, dos extratos dos fungos endofílicos.


Inibição da AChE (IC50) nos extratos acetato de etila de Vermisporium-like (233) e E. nidulans (232) D. boerhaaviae (235) D. portulacae (234).

Conclusões

Todos os extratos apresentaram uma relevante ação antiacetilcolinesterese, em destaque os 233 e 235 com melhor ação inibitória. Os espectros possivelmente demonstram a presença de compostos ácidos carboxílicos e/ou ésteres aromáticos e a presença de grupos O-H fenólicos. Por tanto, o isolamento de metabolitos secundários dos fungos supracitados poderão atuar como possíveis fitoterápicos, com foco para o tratamento da Doença de Alzheimer e possivelmente em doenças negligenciadas como a Leishmaniose.

Agradecimentos

Agradeço à Profa. Selene, pela orientação e disponibilidade. UECE, EMBRAPA, CAPES, CNPQ

Referências

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