Avaliação do fracionamento cromatográfico de metabólitos secundários de partição em diclorometano da espécie Piper cernuum Vell. com potencial anticâncer

ISBN 978-85-85905-23-1

Área

Produtos Naturais

Autores

Marinho, R.F.N. (UNIVERSIDADE FEDERAL FLUMINENSE) ; Angrisani, B.R.P. (UNIVERSIDADE FEDERAL FLUMINENSE) ; Macedo, A.L. (UNIVERSIDADE FEDERAL DE MATO GROSSO DO SUL) ; Moreira, D.L. (FUNDAÇÃO OSWALDO CRUZ) ; Robbs, B.K. (UNIVERSIDADE FEDERAL FLUMINENSE) ; Vasconcelos, T.A. (UNIVERSIDADE FEDERAL FLUMINENSE) ; Valverde, A.L. (UNIVERSIDADE FEDERAL FLUMINENSE)

Resumo

O gênero Piper é um importante grupo de plantas medicinais, sendo utilizadas para o tratamento de febre, dores de cabeça, diarreia, reumatismo, furúnculos, sarna e problemas de estômago. Este gênero apresenta algumas espécies ativas contra linhagens de células do câncer de mama, próstata, cólon, leucemia, entre outras. Com o objetivo de descobrir novos agentes antitumorais, este trabalho realizou fracionamento de partição previamente identificada como citotóxica da espécie Piper cernuum. A visualização de manchas em placas de CCD, utilizando diferentes sistemas de solventes e reveladores possibilitou a observação de separação eficiente de substâncias fenólicas, derivados arilpropanoides e terpenos, previamente identificados por análise de CG-EM da fração ativa.

Palavras chaves

Piper cernuum; fitoquímica; anticâncer

Introdução

O gênero Piper, pertencente à família Piperaceae, é um grupo pantropical com aproximadamente 700 espécies encontradas em várias partes do mundo (TRINDADE et al., 2012). Este gênero representa um grupo importante de plantas medicinais, sendo utilizadas para tratar febre, dores de cabeça, diarreia, reumatismo, problemas de estômago e doenças respiratórias (MOREIRA et al., 2016). Piper apresenta algumas espécies que se mostraram ativas frente a determinadas células cancerígenas, como a Piper barbatum e Piper jacgumontianum que foram ativas contra a linhagem de células do câncer de mama, próstata e cólon (TAYLOR et al., 2013). Mahavorasirikul e colaboradores (2010) demonstram que a Piper chaba foi ativa em linhagem de células CL-6 (colangiocarcinoma), Hep-2 (carcinoma de laringe), HepG2 (hepatocarcinoma). As espécies Piper nigrum e Piper capense mostraram-se ativas contra a linhagem de células da leucemia (KUETE et al., 2013). Em estudo recente realizado por nosso grupo de pesquisa as partições em diclorometano do extrato bruto metanólico de folhas de Piper cernuum Vell. mostraram-se ativas contra linhagem de células escamosas de carcinoma oral (SSC9). Estes extratos foram analisados por cromatografia em fase gasosa (CG) acoplada a espectrômetro de massas (EM), permitindo atribuir os sinais a substâncias pertencentes às classes dos sesquiterpenos, arilpropanoides, diterpenos e lignanas, para o extrato de P. cernuum (MACEDO, 2017). Desta forma, este trabalho teve como objetivo realizar o fracionamento cromatográfico das partições em diclorometano do extrato bruto metanólico de folhas de P. cernuum e um estudo fitoquímico preliminar das frações obtidas.

Material e métodos

As partições em diclorometano dos extratos brutos metanólicos de folhas de P. cernuum obtidos por Macedo (2017) foram submetidas à cromatografia líquida a vácuo (CLV) utilizando funil sinterizado, com gel de sílica (5- 25μm) como fase estacionária e fase móvel em gradiente de polaridade de hexano:acetoato de etila, acetato de etila:metanol e metanol:água. As frações obtidas foram analisadas por Cromatografia de Camada Delgada (CCD) recoberta com gel de sílica. Foram utilizados dois sistemas de solventes: diclorometano:metanol (9,5:0,5) e hexano:acetona (6:4), visando a visualização das substâncias de média e baixa polaridades, respectivamente. As cromatoplacas foram reveladas pela exposição à luz ultravioleta (UV) nos comprimentos de ondas de 254 nm e 365 nm e utilizando vanilina sulfúrica ou sulfato cérico e ácido nítrico.

Resultado e discussão

Por meio do fracionamento do extrato de P. cernuum, foram obtidas 17 frações, com diferentes polaridades (Fig 1 e 2). A presença de terpenos foi identificada através da visualização de manchas de tonalidade rosa. Estas manchas foram melhor observadas (Rf 0,70) quando utilizado o sistema de eluição hexano:acetona, sendo visualizadas em 3 frações diferentes, porem ambas obtidas em baixa polaridade, frações 3, 4 e 5. Contudo, na placa cuja o sistema de eluição visava a visualização de substâncias de média polaridade observou-se presença de uma única mancha de coloração rosa, apenas na fração 4 com Rf de 0,75. Estas mesmas manchas, presentes nas frações 3, 4 e 5, apresentaram tonalidade roxa, ao ser reveladas com sulfato cérico, confirmando a possível presença de terpenos. Uma outra mancha rosácea foi visualizada na fração 9, apresentado Rf igual a 0,45 em ambos os sistemas de eluição utilizados e revelados com vanilina sulfúrica. Esta mancha pode indicar a presença de terpenos de maior polaridade, assim como de ácidos fenólicos. Manchas de coloração lilás foram visualizadas apenas na cromatoplaca eluida por diclorometando:metanol e revelada com vanilina sulfúrica. As manchas foram observadas em 3 diferentes frações (4, 5 e 6), todavia, com Rf idênticos (0,65). A análise dessas manchas sugere a presença de metabolitos secundários de média polaridade, tais como derivados de fenilpropanoides e/ou substâncias fenólicas. A observação das placas, em luz UV a 365 nm, permitiram a verificação da presença de manchas fluorescentes com coloração vermelha alaranjada, que possivelmente correspondem a pigmentos vegetais, como clorofila. As clorofilas puderam ser identificadas em um amplo número de fração, de baixa a média polaridade, nas frações de 4 a 13.

Análises por CCD das frações do extrato de diclometano de P. cernuum obtidas por CLV, tendo como agente revelador: Luz UV-vis 254 e 365 nm.


Análises por CCD das frações do extrato de diclometano de P. cernuum obtidas por CLV, tendo como agente revelador: vanilina sulfúrica e sulfato cérico

Conclusões

O fracionamento da partição em diclorometano da espécie P. cernuum mostrou-se efetivo na obtenção de frações com polaridade diferentes, possibilitando inferir a presença de substâncias fenólicas, derivados arilpropanoides e terpenos, previamente identificados por análise de CG-EM da partição diclorometânica. O processo de fraciomento apresentou-se como um método importante para a concentração das substâncias de interesse, posto que a obtenção dessas frações possibilitará a continuidade do estudo do fracionamento bioguiado, permitindo o isolamento do princípio ativo contra células cancerígena.

Agradecimentos

CNPq, CAPES, FAPERJ.

Referências

KUETE, V.; SANDJO, L. P.; WIENCH, B.; EFFERTH, T. Cytotoxicity and modes of action of four Cameroonian dietary spices ethno-medically used to treat cancers: Echinops giganteus, Xylopia aethiopica, Imperata cylindrica and Piper capense. Journal of Ethnopharmacology, n. 149, p. 245–253, 2013.

MACEDO, A. M. Avaliação química e biológica de espécies de Piper nativas da floresta atlântica. Tese (Doutorado em Química) - Universidade Federal Fluminense – UFF. Rio de Janeiro, 166 p., 2017.

MAHAVORASIRIKUL, W.; VIYANANT, V.; CHAIJAROENKUL, W.; ITHARAT, A.; NA-BANGCHANG, K. Cytotoxic activity of Thai medicinal plants against human cholangiocarcinoma, laryngeal and hepatocarcinoma cells in vitro. BMC Complementary and Alternative Medicine, v. 10, n. 55, 2010.

MOREIRA, D. D. L.; PAIVA, R. A.; MARQUES, A. M.; BORGES, R. M.; BARRETO, A. L. S.; CURVELO, J. A. D. R.; CAVALCANTI, J. F.; ROMANOS, M. T. V.; SOARES, R. M. D. A.; KAPLAN, M. A. C. Bioactive Neolignans from the Leaves of Piper rivinoides Kunth (Piperaceae). Records of Natural Products, v. 10, n. 4, p. 472-484, 2016

TAYLOR, P.; ARSENAK, M.; ABAD, M.J.; FERNÁNDEZ, Á.; MILANO, B.; GONTO, R.; RUIZ, M.; FRAILE, S.; TAYLOR, S.; ESTRADA, O. Screening of Venezuelan medicinal plant extracts for cytostatic and cytotoxic activity against tumor cell lines. Phytotherapy Research, n. 27, p. 530-539, 2013.

TRINDADE, F. T.; STABELI, R. G.; FACUNDO, V. A.; CARDOSO, C. T.; SILVA, M. A. D.; GIL, L. H.; SILVA-JARDIM, I. Evaluation of larvicidal activity of the methanolic extracts of Piper alatabaccum branches and P. tuberculatum leaves and compounds isolated against Anopheles darlingi. Revista Brasileira de Farmacognosia, n. 22, p. 979-984, 2012.