AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE CARRAPATICIDA IN VITRO SOBRE LARVAS DO CARRAPATO RHIPICEPHALUS SANGUINEUS ATRAVÉS DO USO DE FORMULAÇÕES CONTENDO CARVACROL

ISBN 978-85-85905-23-1

Área

Bioquímica e Biotecnologia

Autores

Moreira, J.C. (UFMA) ; Sousa, A.I.P. (UFMA) ; Costa-junior, L.M. (UFMA) ; Soares, A.M.S. (UFMA)

Resumo

O carrapato Rhipicephalus sanguineus tem um forte impacto sobre a saúde dos animais e seu controle é afetado pela resistência aos carrapaticidas sintéticos. O carvacrol pode ser uma alternativa eficiente para o controle dos carrapatos. O objetivo desse trabalho foi desenvolver formulações com efeito carrapaticida contendo carvacrol sobre R. sanguineus. As formulações foram preparadas com tensoativos, viscosificante e carvacrol. Atividade carrapaticida foi avaliada usando o teste de imersão larval. A formulação FBC exibiu alta atividade no teste triagem com o R. microplus (0,26 mg/mL), enquanto que, para R. sanguineus a concentração letal >2 mg/mL. Diante dos resultados, sugere-se o desenvolvimento de produtos carrapaticidas com o uso de substancias naturais.

Palavras chaves

monoterpeno; formulação; controle

Introdução

O carrapato Rhipicephalus sanguineus, é amplamente distribuído no mundo, tendo preferencialmente os cães como hospedeiros, e estes são adequados para todos os estágios parasíticos, além disso, eles não desenvolvem uma resposta imune eficiente contra o carrapato (LABRUNA, 2004; GUGLIELMONE et al., 2006).Segundo a Associação Brasileira da Indústria de Produtos de Animais de Estimação (ABINPET) o faturamento do mercado pet em 2015 e 2016 foi aproximadamente R$ 18 bilhões, tendo destaque para o segmento de medicamento veterinário. Os carrapaticidas sintéticos são os mais utilizados para o controle do R. sanguineus, entretanto, em consequência do uso incorreto desses produtos sem uma estratégia adequada, resultou em um aumento da seleção de carrapatos resistentes a diversos grupos químicos (BEUGNET & FRANC, 2012). O mecanismo de resistência já foi encontrado em químicos como, amitraz, cipermetrina e deltrametrina (Miller et al. 2001).Assim, existe uma preocupação pelo desenvolvimento de alternativas que tenham uma maior eficiência e menor toxicidade (RIBEIRO et al., 2010; CRUZ et al., 2013). O carvacrol é um monoterpeno volátil, presente em vários óleos essenciais de plantas e usado em indústrias alimentícias, cosméticas e farmacêuticas (MILADI et al., 2016; PADUCH, 2007). Esse composto vem apresentando resultados promissores sobre o R. sanguineus e R. microplus (CRUZ et al., 2013; ARAÚJO et al., 2016). Entretanto, formulações ainda não foram desenvolvidas e avaliadas para que se possa pensar em um produto comercial. O presente trabalho visou desenvolver uma formulação com efeito carrapaticida contendo carvacrol sobre larvas R. sanguineus .

Material e métodos

As formulações foram preparadas mediante agitação manual, tendo como principais constituintes um tensoativo primário, tensoativo secundário, agentes de viscosidade e conservante. Duas formulações base foram desenvolvidas (FA e FB), e partindo delas, incorporou-se o carvacrol nas formulações denominadas FAC e FBC na percentagem 5%. O monoterpeno foi adicionado juntamente com os componentes oleosos e posteriormente vertido na fase aquosa. Depois de 24h, foram realizadas avaliações organolépticas e físico-químicos. Para atividade carrapaticida, foi realizado uma triagem inicial usando o teste de imersão larval sobre uma população resistente de R. microplus, para obtenção das concentrações a serem testadas sobre o R. sanguineus , de acordo com a técnica Klafke et al. (2006). As formulações foram diluídas em água destilada em concentrações que variaram 1,56 a 12,5 mg/mL. Foi transferida uma alíquota de 1 mL de cada formulação nas diferentes concentrações para tubos de 1,5 mL, no qual acrescentou-se cerca de 500 larvas de carrapato. Após 10 minutos, as larvas foram colocas sobre papel filtro para secagem. Posteriormente, transferiu-se aproximadamente 100 larvas para pacotes com dimensões de 8,5 × 7,5 cm, que foi fechado com auxílio de clipes. Os testes foram incubados a 27 ± 1°C com umidade relativa (UR) de ≥80% durante um período de 24 horas. Após este período, as larvas vivas e mortas foram contadas. Foi usado como controle água destilada, formulação base e o carvacrol. Para cada concentração foram feitas três repetições. Os dados foram analisados pelo software GraphPad Prism 6.0, obtendo a concentração letal para 50%, com respectivos intervalos de confiança de 95%.

Resultado e discussão

As duas formulações apresentaram parâmetros organolépticos homogêneo, translúcido e não demonstrando separação de fases (Figura 1). O pH das formulações FAC e FBC, com o carvacrol foi 5,5 e 5,6, respectivamente, permanecendo estáveis e inalteradas após a centrifugação. O teste de centrifugação permite o estresse das amostras simulando um aumento na força de gravidade, aumentando a mobilidade das partículas e antecipando possíveis instabilidades (BRASIL, 2004). Em relação aos testes carrapaticidas, a formulação FBC exibiu uma alta atividade com CL50 de 0,26 mg/mL, enquanto que a formulação FAC apresentou CL50 de 3,23 mg/mL. O carvacrol obteve CL50 de 1,66 mg/mL sobre larvas de R. microplus. Para larvas de R. sanguineus, FBC e FAC obtiveram CL50 de 2,88 e 5,22 mg/mL, respectivamente. Os resultados referentes a formulação FAC demonstram que não houve uma boa interação dos componentes envolvidos para que ocorresse uma atuação de forma aditiva com o carvacrol. Somente em FBC usou-se diferentes tipos de tensoativos e um polímero aniônico com a propriedade de formar um filme sobre a área aplicada. A adição desses agentes pode ter favorecido uma maior interação com o carvacrol, contribuindo nas taxas de mortalidade. Conforme Chagas et al.(2003),os artrópodes possuem dois meios de absorção, o lipolítico e hidrofílico, e para uma molécula lipolítica ter seu efeito potencializado na cutícula do carrapato é necessário que ela tenha essas duas vias. O carvacrol apresenta um perfil lipolítico e a adição de componentes, como os tensoativos favorecem a miscibilidade, e, consequentemente torna o sistema com caráter anfifílico. Assim, as moléculas podem penetrar mais facilmente no tegumento do carrapato.

A: Formulação base FA; B: Formulação base FB; C: Formulação FAC com carvacrol; D: Formulação FBC com carvacrol.

Conclusões

Os resultados expostos nesse trabalho demonstraram efeito carrapaticida sobre larvas do carrapato R. microplus e R. sanguineus, assim destaca-se a importância do desenvolvimento de novos produtos provenientes de vias naturais que possibilitem o controle de parasitose e promovam a estabilidade de fármacos com adjuvantes farmacêuticos.

Agradecimentos

A Deus pelo seu infinito amor,a Universidade Federal do Maranhão e ao PIBIC/CNPq pela bolsa concedida e ao Laboratório de Controle de Parasitos.

Referências

ARAÚJO, L. X.; NOVATO, T. P. L.; ZERINGOTA, V.; MATURANO, R.; MELO, D.; DA SILVA, B. C.; DAEMON, E.; CARVALHO, M, G.; MONTEIRO, C. M. O. Synergism of thymol, carvacrol and eugenol in larvae of the cattle tick, Rhipicephalus microplus, and brown dog tick, Rhipicephalus sanguineus. Medical and Veterinary Entomology. v, 30, p. 377–382, 2016.

ABINPET, Associação Brasileira da Indústria de Produtos para Animais de Estimação. Disponível em < http://abinpet.org.br/site/faq/>. Acesso em: 08 de julho de 2018.

BRASIL. Guia de Estabilidade de Produtos Cosméticos. 1. ed., 52 p., ANVISA. Brasília, 2004.

BEUGNET, F.; FRANC, M. Insecticide and acaricide molecules and/or combinations to prevent pet infestation by ectoparasites. Trends in Parasitology, v. 28, n. 7, p. 267-279, 2012.

CRUZ, E. M. O.; COSTA-JÚNIOR, L. M. C.; PINTO, J. A. O.; SANTOS, D. A.; ARAUJO, S. A.; RIGONI-BLANK, M. F.; BACCI, L.; ALVES, P. B.; CAVALCANTI, S. C. H.; BLANK, A. F. Acaricidal activity of Lippia gracilis essential oil and its major constituents on the tick Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Veterinary Parasitology. v. 195, p. 198-202, 2013.

CHAGAS, A. C. S.; PASSOS, W. M.; PRATES, H. T.; LEITE, R. C.; FURLONG, J.; FORTES, I. C. P. Efeito acaricida de óleos essenciais e concentrados emulsionáveis de Eucalyptus spp em Boophilus microplus. Brazilian Journal Of Veterinarian Research and Animal Science. p: 247-253, 2002.

GUGLIELMONE, A. A.; SZABÓ, M. P. J.; MARTINS, J. R. S.; ESTRADA-PEÑA, A. Diversidade e importância de carrapatos na sanidade animal. In: Barros-Battesti, D. M.; Arzua, M; Bechara, G. H. (Eds.). Carrapatos de importância médico veterinária da região neotropical: um guia ilustrado para identificação de espécies. Vox/ICTTD3/Butantan, São Paulo, pp.115-124, 2006

KLAFKE, G.M.; SABATINI, G.A. de; ALBUQUERQUE, T.A.; MARTINS, J.R.; KEMP, D.H.; MILLER, R.J.; SCHUMAKER, T.T.S. Larval immersion tests with ivermectin in populations of the cattle tick Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Acari: Ixodidae) from State of Sao Paulo, Brazil. Veterinary Parasitology, v.142, n.3-4, p.386-390, 2006

LABRUNA, M.B. Biologia-Ecologia de Rhipicephalus sanguineus (Acari: Ixodidae). Revista Brasileira de Parasitologia Veterinária, 13(supl.1):123-124, 2004


MILLER, R.J.; GEORGE, J.E.; GUERRERO, F.; CARPENTER, L.; WELCH, J.B. Characterization of acaricide resistance in Rhipicephalus sanguineus (Latreille) (Acari: Ixodidae) collected from the Corozal army veterinary quarantine center, Panama. Journal of Medical Entomology, v. 38, n. 2, p. 298-302, 2001.

MILADI, H.; ZMANTA, T.; CHAABOUNI, Y.; FEDHILA, K.; BAKHROUF, A.; MAHDOUANI, K.; CHAIEB, K. Antibacterial and efflux pump inhibitors of thymol and carvacrol against food-borne pathogens. Microb. Pathog., 99 (2016), p. 95-100, 2016.

PADUCH, R.; KANDEFER-SZERSZEN, M.; TRYTEK, M.; FIEDUREK, J. Terpenes: substances useful in human healthcare. Arch. Immunol. Ther. Exp., v. 55, p. 315–327, 2007


RIBEIRO, V. L. S.; DOS SANTOS, J. C.; BORDIGNON, S. A. L.; APEL, M. A.; HENRIQUES, A. T.; VON POSER, G. L. Acaricidal properties of the essential oil from Hesperozygis ringens (Lamiaceae) on the cattle tick Riphicephalus (Boophilus) microplus. Bioresour. Technol. 101, 2506–2509, 2010