Avaliação da atividade antifúngica de extratos de flores, folhas e cascas de Vochysia divergens Pohl

ISBN 978-85-85905-21-7

Área

Produtos Naturais

Autores

Bonacorsi, C. (UNIVERSIDADE FEDERAL DE MATO GROSSO) ; Machado Xavier, S. (UNIVERSIDADE FEDERAL DE MATO GROSSO) ; Mendes de Sousa Valladão, D. (UNIVERSIDADE FEDERAL DE MATO GROSSO) ; Regina Andrighetti, C. (UNIVERSIDADE FEDERAL DE MATO GROSSO) ; Cristina Donofrio, F. (UNIVERSIDADE FEDERAL DE MATO GROSSO) ; Stella Gonçalves Raddi, M. (UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA) ; Dênis Battirola, L. (UNIVERSIDADE FEDERAL DE MATO GROSSO)

Resumo

Considerando a presença de Vochysia divergens (cambará) no Pantanal do Mato Grosso e seu uso na medicina popular, este trabalho objetivou avaliar a atividade antifúngica, pela técnica de microdiluição em caldo, para Candida albicans e Candida parapsilosis, de extratos hidroalcoólicos obtidos de folhas, cascas e flores. Nos ensaios com a cepa de C. albicans foi possível estabelecer o valor da concentração inibitório mínima (CIM) de 4000 μg/mL para os extratos de folhas, cascas e flores. Para C. parapsilosis o valor da CIM para os extratos de folhas e cascas foi de 4000 μg/mL e para o extrato de flores de 2000 μg/mL. Também foi observado que o extrato das flores do cambará, na concentração de 1000 μg/mL, conseguiu inibir em 87,48% o crescimento microbiano.

Palavras chaves

Vochysia divergens; Extratos; Antifúngica

Introdução

Vochysia divergens Pohl (Vochysiaceae), popularmente conhecida como cambará, é uma árvore colonizadora de campos inundáveis do Pantanal Matogrossense (CORRÊA, 2007). Considerando a importância da dinâmica desta espécie e a sua utilização na medicina popular, torna-se interessante avaliar e comprovar cientificamente diferentes propriedades biológicas, incluindo a atividade antimicrobiana. Atualmente, a busca de compostos de origem vegetal com atividade antimicrobiana tem sido o principal objetivo de muitos grupos de pesquisa, pois, apesar do grande arsenal terapêutico disponível no mercado, o aumento no número de micro-organismos resistentes tem crescido de maneira assustadora (AQIL et al., 2005; CORREIA et al., 2008; SANGLARD, 2016; CDC, 2017). Sabe-se que a ocorrência espécies de Candida pode ser observada na cavidade oral e em outros locais do corpo humano sem implicar, necessariamente, no desenvolvimento de infecções (SAMARANAYAKE, SAMARANAYAKE, 2001 apud CAVALCANTI et al., 2012). No entanto, diante da perda do equilíbrio biológico, esses micro-organismos podem levar ao desenvolvimento de infecções importantes, se manifestando como doenças infecciosas localizadas ou até mesmo sistêmicas (CORRÊA, ANDRADE, 2006 apud CAVALCANTI et al., 2012). Segundo Cavalcanti et al. (2012), a triagem da atividade antifúngica de extratos vegetais da flora brasileira pode contribuir para identificação de produtos naturais com potente atividade inibitória frente cepas de Candida. Considerando a presença de Vochysia divergens no Pantanal do Mato Grosso e seu uso na medicina popular, este trabalho teve como objetivo avaliar a atividade antifúngica, para Candida albicans e Candida parapsilosis, de extratos obtidos de folhas, cascas e flores.

Material e métodos

Material vegetal. As folhas, cascas e flores de Vochysia divergens foram coletadas Pantanal de Poconé. A identidade botânica da planta foi confirmada na Universidade Federal de Mato Grosso e a exsicata (CNMT 4790) encontra-se armazenada no Herbário Centro-Norte-Mato-Grossense, UFMT – Campus de Sinop. Obtenção dos extratos. Os materiais vegetais (folhas, cascas e flores) foram secos em estufa com circulação de ar (40°C), triturados e armazenados, sob o abrigo da luz, para posterior extração. Os materiais foram submetidos à extração por maceração em etanol a 70% a temperatura ambiente por sete dias, sendo mantida a relação droga:solvente de 1:10 (m:v). As soluções extrativas foram concentradas em evaporador rotativo. Os extratos obtidos (das folhas, cascas e flores) foram solubilizados em dimetilsulfóxido (DMSO) (solução mãe a 50 mg/mL). A maior concentração de DMSO presente nos ensaios de atividade antimicrobiana não interferi no crescimento das leveduras empregadas neste estudo. Avaliação da atividade antifúngica e determinação da concentração inibitória mínima (CIM). A avaliação da atividade antimicrobiana, para Candida albicans ATCC 90028 e Candida parapsilosis ATCC 22019, foi realizada por técnica de microdiluição em caldo, seguindo recomendações do Clinical and Laboratory Standards Institute – CLSI (CLSI, 2008; CLSI, 2013), com adaptações. Todos testes foram acompanhados de crescimento controle e controle de absorbância para cada amostra testada. Os testes foram realizados em triplicata e repetidos, no mínimo, 3 vezes. Neste trabalho, a CIM foi definida como a menor concentração do extrato que reduziu em mais de 90% o crescimento microbiano, comparado ao crescimento controle (CLSI, 2008; OSTROSKY et al., 2008).

Resultado e discussão

Os resultados dos extratos de folhas, cascas e flores de Vochysia divergens na inibição do crescimento de Candida albicans e Candida parapsilosis são apresentados nas Tabelas 1 e 2. Através da análise dos resultados dos ensaios com a cepa de C. albicans foi possível estabelecer o valor da CIM de 4000 μg/mL para os extratos de folhas, cascas e flores de Vochysia divergens. Para a C. parapsilosis o valor da CIM para os extratos de folhas e cascas foi de 4000 μg/mL e para o extrato de flores de 2000 μg/mL. Também foi observado que o extrato de folhas de cambará na concentração de 2000 μg/mL inibiu o crescimento dessa levedura em mais de 40%, comparado ao controle de crescimento na ausência do extrato, e o extrato de flores na concentração de 1000 μg/mL conseguiu inibir em quase 90% o crescimento microbiano. As plantas produzem uma variedade de metabólitos secundários e, assim, podem ser fontes potenciais de novas substâncias ativas com diferentes atividades biológicas de interesse farmacológico (BRAZ FILHO, 2010; MARQUES et al., 2013). Substâncias ativas podem ser encontradas em caule, folhas, raízes, flores, frutos e sementes das espécies vegetais (SILVA, 2004) e vários trabalhos têm reportado propriedades antifúngicas, incluindo para cepas do gênero Candida, de extratos obtidos de diversas partes de plantas medicinais (HOLETZ et al., 2002; SANCHES et al., 2005; GIORDANI et al., 2015). Estudos apontam que o gênero Vochysia é uma fonte de terpenóides flavonoides e outros compostos com potencial microbiano (HESS et al., 1995; LIMA et al., 2010; KELLNER FILHO, 2014). Vochysia divergens, empregada no presente estudo, pode ser fonte de metabólitos com atividade antifúngica.

Inibição do crescimento de Candida albicans


Inibição do crescimento de Candida parapsilosis

Conclusões

Através da análise dos resultados foi possível concluir que Vochysia divergens pode apresentar metabólitos com atividade antifúngica, especialmente para C. parapsilosis, destacando-se o potencial observado com o extrato de flores dessa espécie vegetal. Atualmente, o perfil fitoquímico do extrato das flores está sendo determinado e o mesmo será fracionado e, posteriormente, as frações obtidas serão também avaliadas para atividade contra espécies de Candida.

Agradecimentos

À FAPEMAT pelo apoio financeiro e concessão de bolsa de iniciação científica e à UFMT - Campus de Sinop.

Referências

(1) AQIL, F.; KHAN, M. S.; OWAIS, M.; AHMAD, I. Effect of certain bioactive plant extracts on clinical isolates of beta-lactamase producing methicillin resistant Staphylococcus aureus. Journal of Basic Microbiology, v. 45, n. 2, p. 106-114, 2005. (2) BRAZ FILHO, R. Contribuição da fitoquímica para o desenvolvimento de um país emergente. Química Nova, v. 33 n. 1, p. 229-239, 2010. (3) CAVALCANTI, Y. W.; DE LIMA PÉREZ, A. L. A.; XAVIER, G. D. R.; DE ALMEIDA, L. F. D.; PADILHA, W. W. N. Atividade Antifúngica de Extratos Vegetais Brasileiros sobre Cepas de Candida. Revista Brasileira de Ciências da Saúde, v. 16, n. 1, p. 43-48, 2012. (4) CDC – Center for Disease Control and Prevention. Antifungal Resistance. Disponível em: <https://www.cdc.gov/fungal/antifungal-resistance.html>. Acesso em: 23 jul. 2017. (5) CLSI - CLINICAL AND LABORATORY STANDARDS INSTITUTE. Reference method for broth dilution antifungal susceptibility testing of yeasts. Approved standard, 3th ed. CLSI document M27-A3. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute, 2008. (6) CLSI - CLINICAL AND LABORATORY STANDARDS INSTITUTE. Performance standards for antimicrobial susceptibility testing. Twenty-Third Informational Supplement. CLSI document M100-S23. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute, 2013. (7) CORRÊA, M. F. P. Aspectos químicos e potencial terapêutico de Vochysia divergens (Vochysiaceae), uma planta do pantanal matogrossense. 114f. Dissertação (Mestrado em Química de Produtos Naturais) – Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, 2007. (8) CORREIA, A. F.; SEGOVIA, J. F.; GONÇALVES, M. C.; DE OLIVEIRA, V. L.; SILVEIRA, D.; CARVALHO, J. C.; KANZAKI, L. I. Amazonian plant crude extract screening for activity against multidrug-resistant bacteria. European Review for Medical and Pharmacological Sciences, v. 12, n. 6, p. 369-380, 2008. (9) GIORDANI, C.; SANTIN, R.; CLEFF, M. B. Levantamento de extratos vegetais com ação anti-Candida no período de 2005-2013. Revista Brasileira de Plantas Medicinais, Campinas, v. 17, n. 1, p.175-185, 2015. (10) HESS, S. V.; BRUM, R. L.; HONDA, N. K.; CRUZ, A. B.; MORETTO, E.; CRUZ, R. B.; MESSANA, I.; FERRARI, F.; CECHINEL FILHO, V.; YUNES, R. A. Antibacterial activity and phytochemical analysis of Vochysia divergens (Vochysiaceae). Journal of Ethnopharmacology, v. 47, p. 97-100, 1995. (11) HOLETZ, F. B.; PESSINI, G. L.; SANCHES, N. R.; CORTEZ, D. A. G.; NAKAMURA, C. V.; DIAS FILHO, B. P. Screening of Some Plants Used in the Brazilian Folk Medicine for the Treatment of Infectious Diseases. Memórias do Instituto Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, v. 97, n. 7, p. 1027-1031, 2002. (12) KELLNER FILHO, L. C. Atividade esquistossomicida in vitro de flavonas isoladas de Vochysia divergens (Vochysiaceae). In: 14 Congresso Nacional de Iniciação Científica, São Paulo, SP, Brasil, Anais do 14 Congresso Nacional de Iniciação Científica, 2014. (13) LIMA, R. S.; BÜRGER, M. C.; OLIVEIRA, G.; DE OLIVEIRA, C. R..; RAMOS, L.; DOS SANTOS, M. L.; LIÃO, L.; MENEZES, A. C. S. Identificação e Determinação Estrutural de Triterpenos Isolados de Vochysia cinnamomea Pohl (Vochysiaceae). In: VIII Seminário de Iniciação Científica e V Jornada de Pesquisa e Pós-Graduação Universidade Estadual de Goiás, Anápolis, GO, Brasil, Anais do VIII Seminário de Iniciação Científica e V Jornada de Pesquisa e Pós-Graduação, 2010. (14) MARQUES, M. C. S.; HAMERSKI, L.; GARCEZ, F. R.; TIEPPO, C.; VASCONCELOS, M.; TORRESSANTOS, E. C.; CHANG, M.; GARCEZ, W. S. In vitro biological screening and evaluation of free radical scavenging activities of medicinal plants from the Brazilian Cerrado. Journal of Medicinal Plants Research, v. 7, n. 15, p. 957-962, 2013. (15) OSTROSKY, E. A.; MIZUMOTO, M. K; LIMA, M. E. L.; KANEKO, T. M; NISHIKAWA, S. O; FREITAS, B. R. Métodos para avaliação da atividade antimicrobiana e determinação da Concentração Mínima Inibitória (CMI) de plantas medicinais. Revista Brasileira de Farmacognosia, v. 18, n. 2, p. 301-307, 2008. (16) SANCHES, A. C. C.; LOPES, G. C.; NAKAMURA, C. V.; DIAS FILHO, B. P.; DE MELLO, J. C. P. Antioxidant and antifungal activities of extracts and condensed tannins from Stryphnodendron obovatum Benth. Revista Brasileira de Ciências Farmacêuticas, v. 41, n. 1, 2005. (17) SANGLARD, D. Emerging threats in antifungal-resistance fungal pathogens. Frontiers in Medicine, v. 3, p. 1-10, 2016. (18) SILVA, M. R. O. Detecção da atividade antifúngica de extratos de plantas do Manguezal de Vila Velha, Itamaracá-PE. 61f. Dissertação (Mestrado em Biologia de Fungos) - Centro de Ciências Biológicas, Universidade Federal de Pernambuco, Recife, 2004.