DETERMINAÇÃO MULTIRRESÍDUO DE AGROTÓXICOS EM PÓLEN APÍCOLA EMPREGANDO MÉTODO QuEChERS MODIFICADO E LC-MS/MS

ISBN 978-85-85905-21-7

Área

Química Analítica

Autores

Saibt, N. (UFSM) ; Ribeiro, L.C. (UFSM) ; Bandeira, N.M.G. (UFSM) ; Donato, F.F. (UFSM) ; Prestes, O.D. (UFSM) ; Zanella, R. (UFSM)

Resumo

O declínio da população de abelhas e a contaminação dos produtos apícolas por agrotóxicos estão sendo amplamente discutidos e demandam um melhor conhecimento da situação. Dessa forma, este trabalho teve como objetivo principal desenvolver e validar um método para determinação multirresíduo de agrotóxicos em amostras de pólen apícola utilizando cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas em série (LC-MS/MS). O método proposto permite a determinação de 72 agrotóxicos e foi aplicado em amostras de pólen apícola, obtidas de diferentes regiões do estado do Rio Grande do Sul.

Palavras chaves

Pólen apícola; Agrotóxicos; LC-MS/MS

Introdução

O uso dos agrotóxicos traz benefícios inquestionáveis para a agricultura, garantindo o controle de pragas e o consequente aumento da produtividade (Veiga, 2006). Entretanto, muitas dessas contribuições e práticas ocorrem em detrimento da saúde humana e ambiental, e da manutenção da biodiversidade. Além disso, o uso de agrotóxicos pode levar ao desaparecimento de insetos benéficos dentre as quais se incluem, as abelhas (Apis mellifera). Embora as abelhas não sejam alvo de agrotóxicos, elas são altamente vulneráveis à contaminação, pois estão expostas a essas substâncias enquanto coletam néctar, pólen e água para manutenção da colônia. Há um número cada vez maior de relatos sobre a presença de resíduos de agrotóxicos em abelhas e produtos apícolas (Bénéteau et al., 2013; Bayo et al., 2016). Entre os produtos da apicultura destaca-se o pólen apícola, produzido pelas abelhas a partir do pólen de flores. Este possui propriedades nutritivas e terapêuticas, sendo este o motivo da sua utilização como alimento alternativo e/ou suplemento alimentar (Carpes et al., 2007). As legislações nacionais estabelecem padrões de qualidade e identidade de pólen apícola, mas não determinam os limites máximos de resíduos de agrotóxicos (Brasil, 2001). Dessa forma, este trabalho teve como objetivo principal desenvolver e validar um método para determinação multirresíduo de agrotóxicos em amostras de pólen apícola utilizando cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas em série (LC-MS/MS). Foram avaliados agrotóxicos de diferentes classes, tais como, inseticidas e fungicidas. O método proposto foi aplicado na análise de amostras de pólen apícola nas regiões Central, Sudoeste e Noroeste do estado do Rio Grande do Sul.

Material e métodos

Os agrotóxicos para este estudo foram selecionados com base na legislação estabelecida pela União Europeia para mel e produtos apícolas (pólen apícola e geleia real). Para a determinação dos analitos utilizou-se LC-MS/MS operando no modo de monitoramento de reações selecionadas (SRM), com fonte de ionização por eletronebulização nos modos positivo e negativo. A separação cromatográfica foi realizada em coluna analítica Pursuit XRs Ultra C18 (100 x 2,0 mm; 2,8 µm). O modo de eluição utilizado foi por gradiente empregando como fase móvel (A) solução aquosa de formiato de amônio 5 mmol L-1 e (B) metanol. Considerando a complexidade dessa matriz, uma etapa de preparo de amostra eficiente se faz necessária antes da determinação. As diferentes versões do método QuEChERS (Prestes et al., 2009) foram testadas, bem como o uso da solução aquosa de ácido tricloroacético visando a precipitação de proteínas presentes na matriz. Além disso diferentes sorventes foram analisados na etapa de limpeza do extrato. O método otimizado foi validado avaliando-se os parâmetros linearidade, exatidão, precisão, limite de detecção (LOD), limite de quantificação (LOQ) e efeito matriz.

Resultado e discussão

O método estabelecido envolve uma etapa de homogeneização das amostras de pólen apícola utilizando solução aquosa de tricloroacético, seguido de extração com acetonitrila, partição e limpeza do extrato com MgSO4, PSA, C18 e GCB. A Figura 1 apresenta o fluxograma do método QuEChERS modificado utilizado para extração dos agrotóxicos nas amostras de pólen apícola. A etapa de validação foi realizada fortificando a matriz nos níveis 5, 10, 20 e 50 µg kg-1, avaliando-se assim a recuperação dos compostos, a qual se manteve entre 70 e 120%, com precisão, avaliada através do desvio padrão relativo (RSD), menor que 20%. Coeficientes de determinação (r2) ≥ 0,99 demonstraram a linearidade da resposta dos analitos na faixa de 2,5 a 100 µg L-1. Os limites de detecção e quantificação do método foram de 1,5 a 6 µg kg-1 e de 5 a 20 µg kg-1, respectivamente. Após a etapa de validação, o método foi aplicado em 6 amostras reais de pólen apícola obtidas de diferentes regiões do estado do Rio Grande do Sul e foi possível a identificação e/ou quantificação dos compostos de interesse.

Conclusões

O método QuEChERS modificado estabelecido neste estudo mostrou-se eficaz para a determinação de 72 agrotóxicos em pólen apícola. A detecção dos compostos utilizando o equipamento LC-MS/MS proporcionou satisfatória detectabilidade, seletividade e precisão. Deste modo, conclui-se que o método proposto, empregando QuEChERS modificado e LC-MS/MS, é adequado para a determinação de agrotóxicos em pólen apícola, podendo ser aplicado em análises de rotina.

Agradecimentos

CNPq, CAPES e UFSM

Referências

Brasil (2001) Instrução normativa Nº 3 do regulamento brasileiro, Janeiro 19, 2001.
Badiou-Bénéteau, Benneveau A, Géret F, Delatte H, Becker N, Brunet JL,Reynaud B, Belzunces LP (2013) Honeybee biomarkers as promising tools to monitor environmental quality. Environ Int 60:31–41.
Bayo SF, Goka K (2016) Impacts of Pesticides on Honey Bees. Beekeeping and Bee Conservation 78-97.
Carpes ST, Begnini R, Matias de Alencar S, Masson ML (2007) Study of preparations of bee pollen extracts, antioxidant and antibacterial activity. Ciênc Agrotec 31:1818-1825.
Prestes OD, Friggi CA, Adaime MB, Zanella R (2009) QuEChERS – A modern sample preparation method for pesticide multiresidue determination in food by chromatographic methods coupled to mass spectrometry. Quim. Nova 32:1620-1634.
Veiga MM (2006) Análise da contaminação dos sistemas híbridos por agrotóxicos numa pequena comunidade rural do sudeste do Brasil. Caderno Saúde Pública 22:2391-2399.