Avaliação de sistema de microextração em fase sólida para extração de rotenona em timbó (Ateleia glazoviana Baill) e posterior identificação por ESI-ToF-MS

ISBN 978-85-85905-21-7

Área

Iniciação Científica

Autores

Pazinatto, B.M. (IFRS) ; Kreling, B.E. (IFRS) ; Theisen, M.C. (IFRS) ; Campos, B.C. (IFRS) ; Montezano, E.M. (IFRS) ; Iop, G.D. (UFSM) ; Santos, D. (UFSM) ; Cruz, S.M. (IFRS)

Resumo

Timbó é nome pelo qual são conhecidas na Amazônia diversas plantas de cultura pré-colombiana, ainda hoje utilizadas pelos índios. Possui caráter inseticida devido à presença de macromoléculas orgânicas, sendo a principal delas a rotenona. Há muitas espécies de timbó, contudo, a Ateleia glazioviana Baill é a espécie de timbó de maior ocorrência no oeste e meio oeste de SC e, também, no noroeste do RS, contudo no IFRS - Campus Ibirubá. O objetivo deste trabalho foi identificar a presença de rotenona nas plantas de timbó Ateleia glazoaviana Baill nos extratos obtidos por microextração em fase sólida (SPME) em diferentes épocas do ano.

Palavras chaves

Metodologia; microextração; rotenona

Introdução

Os inseticidas botânicos são produtos derivados de plantas ou parte delas, podendo ser o próprio material vegetal utilizado de várias formas. Na forma de pó, após secagem do material ao ar livre ou em estufa com circulação de ar, o material é moído até ser obtido um pó, por extração aquosa, geralmente é mais demorado, pois passa por uma série de etapas, como secagem, moagem, imersão em água, agitação, repouso e filtragem ou por extração com solventes orgânicos. Antes da Segunda Guerra Mundial, o pó das raízes dos timbós era um dos produtos de exportação da Amazônia. Nesse período, diversos produtos eram feitos a partir da extração da rotenona como, o combate às pragas da lavoura, insetos de hábitos domésticos e, também, no combate aos ectoparasitas de animais domésticos. No entanto, desde o advento dos inseticidas sintéticos durante a segunda guerra, alguns dos quais diversificados em suas fórmulas de fabricação, passaram a apresentar índices tão elevados de toxicidade que deixaram de serem chamados defensivos agrícolas e, hoje são chamados de agrotóxicos. Atualmente, em consequência do desenvolvimento de estudos e pesquisas, os timbós voltaram a despertar interesse, principalmente, pelas possibilidades de se tornarem sucessores eficientes dos produtos sintéticos. No presente trabalho a microextração em fase sólida (SPME) é proposta a identificação de rotenona, em plantas de timbós presentes no IFRS-Campus Ibirubá.

Material e métodos

Um sistema de SPME foi adaptado no laboratório a partir dos materiais disponíveis. Para isso, foi montado um sistema que consiste em uma bomba de vácuo acoplada a um balão de fundo redondo de 250 mL, no qual foram colocados cartuchos (seringas) contendo 500 mg de amostra. Foram avaliados os seguintes parâmetros: eluente utilizado, temperatura e quantidade de eluente, massa de amostra e composição do cartucho. A extração foi feita em 4 etapas: i) ativação do adsorvente a partir da introdução de 5 mL do eluente na seringa, ii) condicionamento do adsorvente com 5 mL do eluente adequado, iii) introdução da amostra, iv) introdução do eluente em volumes variáveis de 10 mL e 15 mL e v) coleta do analito. Com base na literatura, os solventes utilizados foram etanol 95% (Vetec, Brasil) e propanona 99,5% (Mazzochini, Brasil). Como agente adsorvente, foi utilizado sílica gel (Neon, 4-8mm). Após avaliação do método de preparo de amostra foi feita a identificação do composto nos extratos por cromatografia a líquido por tempo de vôo acoplado a espectrometria de massas (ESI-ToF-MS). Para identificação, foram utilizados os seguintes parâmetros: capilaridade (2,5 kV), voltagem do cone (25 V), cone extrator (4 V), gás de dessolvatação (400 L h-1), gás do cone (10 L h-1), temperatura de dessolvatação (400 ºC) e temperatura da fonte (150 °C).

Resultado e discussão

Inicialmente, de maneira qualitativa, foi feita a identificação da molécula da rotenona, através de indicadores. Para isso, foi aplicado o teste de Durham, no qual cerca de 50 mg de amostra (em pó, já cominuídas), foram colocados em placa de petri. Em seguida, foram adicionados 1 mL de ácido nítrico (HNO3) concentrado (65%, d = 1,18 mL g-1) e, após o aparecimento da coloração amarelada, 1 ml de hidróxido de amônio (30%, d = 0,91 mL g-1), vagarosamente, até o aparecimento da coloração verde-azulada. Essa coloração indica a presença de rotenona na amostra. Contudo, este método não permite a extração da rotenona, apenas a identificação qualitativa. Com o objetivo de extrair o composto foi feita a extração de modo convencional, com agitação manual e funil de decantação. No entanto, para as folhas coletadas na primavera não houve a identificação do composto no extrato. O espectro de massas obtido por ESI-ToF-MS pode ser observado na Figura 1. Sendo assim, a técnica de SPME foi avaliada para a extração da rotenona. Dessa maneira, foi confeccionado um sistema de microextração montado com materiais disponíveis no laboratório, conforme descrito em materiais e métodos. As soluções obtidas após as extrações pelo método de SPME foram introduzidas no equipamento de ESI-ToF-MS. Pode ser observado no espectro obtido (Figura 2) que após o método de preparo de amostras (SPME) foi possível identificar a presença do composto de rotenona nas amostras de timbó coletadas na primavera e no verão.

Espectro de massas obtido após extração convencional da amostra de timbó.


Espectro de massas obtido após extração da rotenona utilizando SPME.

Conclusões

De acordo com os espectros obtidos foi possível identificar a presença da rotenona (P.M.= 394,41 g/mol) no fragmento M+1 = 393,0699 utilizando como solvente a propanona. Desta forma, com o desenvolvimento desta metodologia, foi possível a extração e identificação da molécula de rotenona em extratos de timbó Ateleia glazioviana Baill.

Agradecimentos

A Universidade Federal de Santa Maria pelo suporte e, também, ao programa PIBIC- EM/IFRS/CNPq pela bolsa concedida.

Referências

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