AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIOXIDANTE DE FUNGO ISOLADO DE SOLO DA CIDADE DE MACAPÁ-AP

ISBN 978-85-85905-19-4

Área

Bioquímica e Biotecnologia

Autores

Miranda do Nascimento, J. (UNIVERSIDADE DO ESTADO DO AMAPÁ) ; Manuela Sobral da Costa, F. (UNIVERSIDADE DO ESTADO DO AMAPÁ) ; Gleyson Pantoja Campos, E. (UNIVERSIDADE DO ESTADO DO AMAPÁ) ; Baden da Conceição Araújo, A. (UNIVERSIDADE DO ESTADO DO AMAPÁ) ; Eduardo da Silva Júnior, S. (UNIVERSIDADE DO ESTADO DO AMAPÁ) ; Maléamà Sfair Pires, A. (UNIVERSIDADE DO ESTADO DO AMAPÁ) ; Moreira de Jesus, A. (UNIVERSIDADE DO ESTADO DO AMAPÁ) ; Araújo da Silva, G. (UNIVERSIDADE DO ESTADO DO AMAPÁ)

Resumo

A demanda por substancia com potencial antioxidante vem crescendo para aplicação da indústria farmacêutica e alimentícia. Entre as fontes de antioxidantes, os fungos se destacam pela possibilidade de cultivo em escala industrial. Neste trabalho visa isolar, identificar e caracterizar o potencial antioxidante dos fungos do solo da cidade de Macapá. Com a amostra coletada o isolado foi obtido em Ágar Sabouraud, transferido para em meio BD após isso foi realizado o fracionamento do extrato fúngico, e as frações obtidas foram avaliadas pelo método de atividade antioxidante total com fosfomolibdato, comparadas ao ácido ascórbico. Os componentes extraídos com residual apresentaram o maior potencial antioxidante (155,13%) em relação ao padrão. Caracterizando substancias antioxidantes no fungo.

Palavras chaves

FUNGOS; ANTIOXIDANTE; ÁGAR SABOURAUD

Introdução

O Brasil possui uma elevada biodiversidade, quando comparado com o resto do mundo, o que leva o país a ter um grande potencial biotecnológico. A floresta amazônica, por exemplo, pode ser destacada, onde estudos são concentrados afim de que se possa utilizar dessa diversidade biológica para diversas finalidades. Apesar dos esforços, ainda são muito escassos estudos quando se trata da Amazônia (SOUZA, 2004). Para extração de compostos ativos com propriedades antioxidantes, destacam-se as rotas biotecnológicas, que se mostram eficaz para a produção de tais substâncias. Para utilização de um microrganismo na indústria, se faz necessário o desenvolvimento de uma pesquisa a respeito da propriedade de interesse do mesmo, podendo assim ser avaliada a viabilidade de sua aplicação na indústria (ZANETTE, 2013). Os fungos são os microrganismos mais importantes quando se trata de aplicação industrial, por apresentarem um grande potencial biotecnológico, sendo utilizado principalmente para a produção de: vitaminas, pigmentos, enzimas, além de outros produtos com interesse econômico (ADRIO; DEMAIN, 2003). O principal fator para dessa elevada utilidade industrial de fungos, se dá devido a sua grande diversidade, com uma estimativa de 1,5 milhões de espécies, grande parte delas ainda não catalogadas (HAWKSWORTH, 1991). Em virtude a essa grande quantidade de fungos existente, estudos devem ser realizados afim de identificar e analisar o potencial industrial dos metabólitos por eles produzidos (BENNETT, 1998). Neste trabalho foi realizado a identificação e caracterização do potencial antioxidante de um fungo isolado do solo de Macapá-AP, tendo em vista sua possível aplicação na indústria.

Material e métodos

Uma amostra de solo de Macapá-AP foi coletada para pesquisa da diversidade total dos fungos. Em seguida foram preparadas amostra de solo em água em três diluições, 10-4, 10-5 e 10-6 g/ml, afim de manter todas as espécies de fungos presente no solo. Cada diluição de solo foi cultivada em meio de cultura Ágar Sabouraud para crescimento das colônias de fungo durante 21 dias em uma estufa a 25°C. Após esse período o número de unidades formadoras de colônia foi estimado para cada diluição, então foi escolhida uma das cepas e isolada para ser repicada em meio BD durante 14 dias a 35°C. A extração dos compostos ativos foram feitas com os solventes, hexano e acetato de etila. As frações obtidas após a extração foram submetidas ao teste com reagente fosfomolibdato que é baseado na redução do Mo (VI) para Mo (V), com mudança de coloração da solução, diante à presença de compostos antioxidantes. O reagente fosfomolibdênio foi obtido através da reação de uma solução de fosfato sódico monobásico (28 ml, 0,1 mol/L), uma solução molibdato de amônio (12 ml, 0,3 mol/L) e uma solução de ácido sulfúrico (20mL, 3mol/L), com o volume final ajustado para 100 ml. As frações obtidas na extração, fração acetato de etila, hexânica e residual, foram testadas em triplicata. Cada fração foi diluída à concentração final de 200 μg/ml e em seguida 0,3 ml de alíquotas foram transferidas em tubos de ensaios, e posteriormente adicionados 3 ml do reagente fosfomolibdênio. As amostras permaneceram em banho de água por 90 minutos a 90 °C, após o período de aquecimento foram lidas as absorbâncias das amostras à 695 nm (SP-22 Biospectro). Para análise dos resultados foi construída uma curva padrão com soluções de ácido ascórbico nas concentrações de 12,5-200 μg/ml (PRIETO et al., 1999).

Resultado e discussão

Com a retirada das placas da estufa o crescimento fúngico foi observado em suas diluições 10-4, 10-5 e 10-6 g/ml, sendo quantificado o número de Unidades Formadoras de Colônia (UFC) como critério de viabilidade, como mostra na tabela 1. Foi realizada a escolha da colônia e a identificação da classificação do fungo. De acordo com suas características macroscópicas e microscópicas através de microscopia óptica (Modelo XS-200 TALIN), identificou-se a espécie isolada como ASPERGILLUS sp. A análise dos extratos fúngicos de acetato etila, hexano e residuais foram submetidas pelo método fosfomolibdênio e comparadas com padrão de acido ascórbico, considerado como 100% de atividade para o potencial antioxidante dos extratos. O residual apresentou o maior resultado de 155,13±4,29 % como mostra a tabela 2, este resultado é justificado devido à polaridade do solvente ocasionando a extração de moléculas de fração intermediaria. Enquanto o extrato hexano sendo a fração apolar extraiu compostos lipídicos, e AcEOT extração de moléculas polares como compostos hidroxilados e carboidratos. Os fungos filamentosos são usados em vários processos industriais como na produção de enzimas, vitaminas, polissacarídeos, polióis, pigmentos, lipídios e glicolipídios. Alguns destes são comercializados, enquanto outros são utilizados na biotecnologia (ADRIO; DEMAIN, 2003). O gênero Aspergillus, tem sido utilizado com sucesso para a produção de proteínas recombinantes, tanto de origem fúngica como de outras fontes. Alguns exemplos são glicoamilase, quimosina bovina, lactoferrina humana, interleucina- 6 humana e taumatina (WANG et al, 2005; SHARMA et al, 2009).

Unidades formadoras de colônia de solo coletado da cidade de Macapá-AP


Porcentagem de atividade antioxidante das frações hexânica, acetato de etila e residual do extrato de fungo Asperrgilus sp

Conclusões

Os resultados positivos do fungo isolado em solo amapaense, há diversas aplicações. A grande diversidade de microrganismos com potencial biotecnológico une-se a necessidade da indústria, demonstrando a importância de seguir com os estudos de bioprospecção. Este trabalhou mostrou que o fungo Aspergillus em sua fração residual tem um grande potencial antioxidante bem acima do acido ascórbico, o qual demonstra a possibilidade de explorações e estudos mais detalhado, como critérios pra possíveis aplicações comercias e industriais.

Agradecimentos

Os autores agradecem a Universidade do Estado do Ámapa

Referências

ADRIO, J. L.; DEMAIN, A. L. Fungal biotechnology. Int. Microbiol., v. 6, p. 191-199, 2003.

BENNETT, J. W. Mycotechnology: the role of fungi in biotechnology. J.Biotechnol., v. 66, p. 101-107, 1998.

HAWKSWORTH, D. L. The fungal dimension of biodiversity: magnitude, significance, and conservation. Mycol. Res., v. 95, p. 641-655, 1991.

PRIETO, P.; PINEDA, M.; AGUILAR, M. Spectrophotometric Quantitation of Antioxidant Capacitythrough the Formation of a Phosphomolybdenum Complex: Specific Application to the Determination of Vitamin E. Analytical Biochemistry, v. 269, p. 337-34, 1999.

SOUZA, AQL de et al. Atividade antimicrobiana de fungos endofíticos isolados de plantas tóxicas da amazônia: Palicourea longiflora (aubl.) rich e Strychnos cogens bentham. Acta Amazônica, v. 34, n. 2, p. 185-195, 2004.

SHARMA. R, et al."Approaches for refining heterologous protein production in filamentous fungi."World Journal of Microbiology and Biotechnology. v. 25, n. 12, p. 2083-2094, 2009.

WANG. L, et al. "Bioprocessing strategies to improve heterologous protein production in filamentous fungal fermentations." Biotechnology advances. v. 23, n. 2, p. 115-129, 2005.

ZANETTE, G. F. Pigmentos Naturais Produzidos por Fungos Filamentosos Isolados de Theobroma grandiflorum (Willd. ExSpreng.) Schum. (cupuaçu). 2013. 110 f. Tese (Doutorado em Biotecnologia) – Universidade Federal do Amazonas, Manaus. 2013.