Determinação de polifenóis em sementes de funcho recorrendo à extração líquido-líquido assitida por salting-out (SALLE)

ISBN 978-85-85905-15-6

Área

Química Analítica

Autores

Fé, T. (UNIVERSIDADE FEDERAL DE MATO GROSSO) ; Valente, I.M. (UNIVERSIDADE DO PORTO) ; Moreira, M. (INSTITUTO POLITÉCNICO DO PORTO) ; Gonçalves, L. (UNIVERSIDADE DO PORTO) ; Almeida, P.J. (UNIVERSIDADE DO PORTO) ; Rodrigues, J.A. (UNIVERSIDADE DO PORTO)

Resumo

A aplicação da extração líquido-líquido assistida por salting-out (SALLE) a amostras de plantas está bem descrita, mas destina-se essencialmente à análise de contaminantes (pesticidas, toxinas, etc.). Porém, as potencialidades desta técnica são vastas e permitem a sua aplicação com outros objetivos. Neste trabalho utilizou-se a SALLE para a quantificação de polifenóis em sementes de funcho (Foeniculum vulgare). Os polifenóis identificados na amostra (ácido clorogênico, derivados do ácido cafeico e de flavonóis) foram quantificados entre 0,9 ± 0,3 e 202 ± 10 mg/100 g. A metodologia apresentada é uma nova aplicação para a SALLE e uma ferramenta simples para a preparação de amostras para caracterização fitoquímica.

Palavras chaves

EXTRAÇÃO; CROMATOGRAFIA; FITOQUÍMICA

Introdução

Uma das aplicações mais interessantes do efeito de salting-out é a indução da formação de duas fases líquidas imiscíveis quando se misturam solventes orgânicos miscíveis com a água (propanol, acetona, acetonitrila, etc.) e água. Para explicar este fenômeno considera-se que a adição de eletrólitos a estas misturas enfraquece/quebra as forças de solvatação entre o solvente orgânico e a água, originando a formação de duas fases líquidas. Associado a este processo é possível extrair solutos da fase aquosa para a fase orgânica num processo denominado extração líquido-líquido assistida por salting-out (SALLE) (VALENTE et al, 2013a). O interesse por esta técnica é crescente e tem vindo a ser bastante disseminada por ser a base do procedimento QuEChERS (ANASTASSIADES et al, 2003; VALENTE et al, 2013b). A aplicação da SALLE em plantas encontra-se ainda pouco explorada. No entanto, as potencialidades desta técnica são vastas e devem ser estudadas. Neste trabalho utilizou-se a SALLE para a determinação de polifenóis em sementes de funcho (Foeniculum vulgare). As amostras foram extraídas com uma mistura de acetonitrila-água utilizando sulfato de amônio para promover a separação de fases e consequente extração dos analitos para a fase orgânica. O extrato foi analisado por cromatografia líquida de alta eficiência com detecção UV (HPLC-UV).

Material e métodos

Os polifenóis de sementes de funcho (Foeniculum vulgare) provenientes de Portugal foram extraídos pela técnica de SALLE. Num tubo de plástico de 50 mL coloca-se 1 g de amostra, 5 mL de água, 5 mL de acetonitrila e 0,7 g de sulfato de amônio. Agita-se a mistura por 30 min (agitador IKA modelo RS 10 Control), seguindo-se centrifugação a 6000 rpm durante 2 min (centrífuga Hermle Labortechnik modelo K 300 K) para promover a separação das fases líquidas. No final recolhe-se uma alíquota da fase superior (extrato) para análise por HPLC-UV (Jasco PU-2089 Plus com detetor UV MD-1510). As separações cromatográficas foram realizadas à temperatura ambiente numa coluna Gemini C18 (250 x 4,6 mm; 5 μm) usando uma mistura de (A) metanol e (B) 0,1% ácido fórmico como fase móvel a 0,8 mL/min. O volume de injeção foi de 20 μL e o comprimento de onda de detecção foi 280 nm.

Resultado e discussão

Na Figura 1 encontra-se representado o cromatograma de um extrato de sementes de funcho. Os compostos extraídos da amostra foram identificados por comparação do tempo de retenção, do espectro de massa e do espectro UV com soluções padrão e com os resultados obtidos por outros autores (PAREJO et al, 2004b). Verificou-se que a maioria dos compostos extraídos das sementes de funcho são derivados do ácido cafeoilquínico e da quercetina. Foram igualmente detetados derivados de outros flavonóis (de isoramnetina e de canferol). Os compostos identificados foram quantificados no extrato de sementes de funcho através do método da curva de calibração com padrão interno (xantohumol). As curvas de calibração utilizadas foram obtidas a partir de soluções padrão de ácido cafeico e quercetina. Os resultados encontram-se na Tabela 1. O teor dos polifenóis quantificados na amostra variou entre (0,9 ± 0,3) e (202 ± 10) mg/100 g, sendo que o funcho é composto maioritariamente pela quercetina-3-O-glucurónido. Os valores de ácido clorogênico e quercetina-3- O-glucurónido encontrados foram semelhantes aos obtidos por outros autores quando a extração foi realizada em meio aquoso (BILIA et al, 2000). Relativamente aos restantes polifenóis identificados neste trabalho, os teores obtidos são inferiores aos reportados na literatura (PAREJO et al, 2004a). No entanto, estas diferenças poderão estar relacionadas com o fato de nesses trabalhos se realizar uma remoção prévia da fração lipídica das sementes de funcho.

Cromatograma de um extrato de sementes de funcho obtido por HPLC-UV (280 nm)


Teor dos compostos fenólicos identificados no extrato de funcho

Conclusões

A metodologia desenvolvida demonstrou que é possível realizar a extração de polifenóis de sementes de funcho através da técnica de SALLE. O procedimento experimental é simples e de fácil execução, não tem requisitos especiais em termos de equipamento de laboratório e tem baixo consumo de solventes e amostra. Além disso, o extrato é diretamente compatível com a cromatografia líquida.

Agradecimentos

Trabalho financiado pelo FEDER através do COMPETE e FCT (projetos UID/QUI/50006/2013 e NORTE-07-0124-FEDER-000069 e bolsas de pós-doutorado SFRH/BPD/97049/2013 e SFRH

Referências

ANASTASSIADES, M.; LEHOTAY, S. J.; ŠTAJNBAHER, D.; SCHENCK, F. J.; Fast and easy multiresidue method employing acetonitrile extraction/partitioning and "dispersive solid-phase extraction" for the determination of pesticide residues in produce. Journal of AOAC International, 86, 412-431, 2003.

BILIA, A.R.; FUMAROLA, M.; GALLORI, S.; MAZZI, G.; VINCIERI, F. F.; Identification by HPLC-DAD and HPLC-MS analyses and quantification of constituents of fennel teas and decoctions. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 48, 4734-4738, 2000.

PAREJO, I.; VILADOMAT, F.; BASTIDA, J.; CODINA, C.; Development and validation of a high-performance liquid chromatographic method for the analysis of antioxidative phenolic compounds in fennel using a narrow bore reversed phase C-18 column. Analytica Chimica Acta, 512, 271-280, 2004a.

PAREJO, I.; JAUREGUI, O.; SANCHEZ-RABANEDA, F.; VILADOMAT, F.; BASTIDA, J.; CODINA, C.; Separation and characterization of phenolic compounds in fennel (Foeniculum vulgare) using liquid chromatography-negative electrospray ionization tandem mass spectrometry. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 52, 3679-3687, 2004b.

VALENTE, I. M.; GONÇALVES, L. M.; RODRIGUES, J. A.; Another glimpse over the salting-out assisted liquid-liquid extraction in acetonitrile/water mixtures. Journal of Chromatography A, 1308, 58-62, 2013a.

VALENTE, I.M.; SANTOS, C. M.; MOREIRA, M. M.; RODRIGUES, J. A.; New application of the QuEChERS methodology for the determination of volatile phenols in beverages by liquid chromatography. Journal of Chromatography A, 1271, 27-32, 2013b.