Identificação de alcaloides produzidos por Guatteria australis

ISBN 978-85-85905-10-1

Área

Produtos Naturais

Autores

Aparecida Costa Campos, V. (UFLA) ; Santos Alves, D. (UFLA) ; Ferreira Oliveira, D. (UFLA) ; Paulo Campos, V. (UFLA) ; Andrade Carvalho, G. (UFLA)

Resumo

Com vistas a contribuir para o desenvolvimento de novos produtos para o controle do nematoide parasita de plantas Meloidogyne incognita, buscou-se isolar e identificar as substâncias presentes na fração solúvel em diclorometano, proveniente do extrato da planta Guatteria australis, já que tal fração se mostrou ativa contra o referido nematoide em trabalho previamente realizado. Após várias etapas de fracionamento com o uso de técnicas cromatográficas, seguidas de análises uni- e bidimensionais por espectroscopia de ressonância magnética nuclear de ¹H e ¹³C, três alcaloides foram purificados e identificados: lisicamina, trans-N-feruloiltiramina e 8-oxipseudopalmatina.

Palavras chaves

Annonaceae; Meloidogyne; Alcaloide

Introdução

Dentre os inúmeros problemas fitossanitários mundialmente enfrentados pelos agricultores, os nematoides do gênero Meloidogyne merecem posição de destaque. São amplamente disseminados em todo o mundo e atacam praticamente todos os vegetais cultiváveis. É estimado que Meloidogyne spp. causem prejuízos mundiais que excedem os 100 bilhões de dólares por ano (Sasser et al., 1987). Dentre os métodos disponíveis para a redução populacional de nematoides fitoparasitas, o controle químico é a opção comumente empregada. Entretanto, o mesmo muitas das vezes não se apresenta eficiente. Ademais, os produtos comerciais utilizados possuem alta toxicidade ao ambiente e ao homem e, ainda, elevado custo para o agricultor em geral. Deste modo, algumas possibilidades para contornar tal problema têm sido investigadas, dentre as quais cabe mencionar o emprego de produtos de origem vegetal, já que as plantas são capazes de produzir substâncias com atividade nematicida (Oliveira et al., 2007), sendo, portanto, muito promissoras para o desenvolvimento de novos nematicidas. Em trabalho preliminar (resultados não publicados) se observou que a fração solúvel em diclorometano do extrato das cascas de Guatteria australis A.St.-Hil (Annonaceae) apresentava atividade contra Meloidogyne incongita (Kofoid & White) Chitwood. Em decorrência, buscou-se identificar as substâncias presentes na referida fração com vistas a contribuir para o desenvolvimento de novos produtos com atividade nematicida.

Material e métodos

Cascas de G. australis foram coletadas, secas, moídas e submetidas a sete extrações estáticas com metanol (MeOH). As fases líquidas foram combinadas, resultando em um material líquido que foi concentrado até secura em evaporador rotatório. Após partição do resíduo obtido entre água e diclorometano, a fase orgânica foi concentrada até secura em evaporador rotatório e liofilizada. Uma alíquota (100 µL) da solução proveniente da dissolução do resíduo liofilizado em solução aquosa de Tween 80 a 0,01 g/mL, foi adicionada a 20 µL de uma suspensão aquosa contento de 20 a 30 juvenis do segundo estágio (J2) de M. incognita e, após 48 h a 25,0 ºC, contaram-se os J2 vivos e mortos. Empregaram-se solução aquosa de Tween 80 e o nematicida comercial carbofuran como controles. Os valores obtidos foram submetidos à análise de variância (ANAVA) e comparação das médias segundo o teste de Scott e Knott (1974) a 5 % de probabilidade. Quanto ao restante da fração solúvel em diclorometano, foi submetido a sucessivos fracionamentos por cromatografia em coluna de sílica do tipo flash (4x17 cm), direcionados por análises por cromatografia em camada fina com placas de alumínio recobertas com sílica gel impregnada com indicador de fluorescência. As frações mais promissoras foram submetidas a análises e purificações por cromatografia líquida de alta eficiência em aparelho equipado com detector UV/VIS em arranjo de diodos (DAD) e coluna de sílica Gemini (Phenomenex). Com este procedimento foram purificadas três substâncias que, em seguida, foram dissolvidas em clorofórmio deuterado e analisadas por espectroscopia de ressonância magnética nuclear (RMN; ¹H: 600 MHz; ¹³C: 151 MHz).

Resultado e discussão

A fração solúvel em diclorometano, proveniente do extrato das cascas de G. australis, causou mortalidade de J2 de M. incognita estatisticamente igual à observada para o nematicida comercial carbofuran, o que confirmou os resultados preliminares, segundo os quais tal planta apresentava potencial para uso no controle de nematoides. No espectro de RMN ¹H de uma das substâncias isoladas se observavam sinais acima de 7,20 ppm, que são característicos de sistemas aromáticos, enquanto os singletos em 4,08 e 4,00 ppm, no mesmo espectro, sugeriam a presença de grupos metóxi. O sinal em 182,9 ppm no espectro de ¹³C era condizente com a presença de uma carbonila na estrutura, enquanto o alto valor de deslocamento químico do dupleto em 8,88 ppm no espectro de ¹H parecia bastante comum os observados para sistemas aporfínicos. Somando-se tais informações às várias outras que puderam ser extraídas dos espectros de ¹H e ¹³C, bem como das correlações homo e heteronucleares, identificou-se tal estrutura como sendo a lisicamina (Figura 1; Khairana et al. 2012). De forma análoga, os dados de RMN extraídos dos espectros de RMN oriundos de experimentos uni- e bidimensionais com as outras duas substâncias permitiram identificá-las como sendo a trans-N-feruloiltiramina (Wang et al. 2012) e a 8-oxopseudopalmatina (Figura 1; Costa, et al., 2010).

Substâncias isoladas de Guatteria australis.

Conclusões

Confirmou-se a atividade nematicida de substâncias produzidas por G. australis (cascas), o que demonstra o potencial desta planta para uso no desenvolvimento de novos produtos para o controle de nematoides parasitas de plantas. O fracionamento da referida fração resultou no isolamento de três alcaloides: lisicamina, trans-N-feruloiltiramina e 8-oxopseudopalmatina. Estudos posteriores deverão ser realizados para avaliar a atividade nematicida das substâncias isoladas contra M. incognita.

Agradecimentos

À CAPES pela concessão de bolsa de estudo, ao CNPq e à FAPEMIG pela concessão de recursos, e ao LNBio pelo acesso ao equipamento de RMN.

Referências

COSTA,E. V; X.; PINHEIRO, M. L.; BARISON, A.; CAMPOS, F. R.; SALVADOR, M. J.; MAIA, B. H. L. N. S.; CABRAL, E. C.; EBERLIN, M. N. Alkaloids from the bark of Guatteria hispida and their evaluation as antioxidant and antimicrobial agents. Journal of Natural Products, v. 73, p. 1180-1183, 2010.
KHAIRANA, H.; JAMAL, J. A.; JALIL, J. Phytochemical study of Cananga odorata (Lam) Hook. F. & Thomson & Thoms (Annonaceae). International Journal of Pharmacy & Pharmaceutical Sciences, v. 4, p. 465-467, 2012.
OLIVEIRA, D. F.; CARVALHO, H. W. P.; NUNES, A. S.; SILVA, G. H.; CAVALHEIRO, A. J.; CAMPOS, V. P. Atividade de carboidrato purificado a partir da cebola (Allium cepa L.) e de carboidratos comerciais sobre juvenis de Meloidogyne exigua Goeldi. Nematologia Brasileira, v. 31, p. 202-209, 2007.
SASSER, J. N.; FRECKMAN, D. W. A world perspective on nematology: the role of society. In: VEECH, J. A., DICKERSON, D. W. Vistas on nematology. Hyattsville, USA: Society of Nematologists, p. 7-14, 1987.
WANG, T.; YUAN, Y.; WANG, J.; HAN, C.; CHEN, G. Anticancer activities of constituents from the stem of Polyalthia rumphii. Pakistan Journal of Pharmaceutical Sciences, v. 25. n. 2, p. 353-356, 2012.