SÍNTESE E AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE CITOTÓXICA DE UM NOVO DERIVADO TIAZÓLICO

ISBN 978-85-85905-10-1

Área

Química Orgânica

Autores

Silva, I.M. (UFPE/FABEJA) ; Silene Carneiro, N. (UFPE) ; Albuquerque, J.F.C. (UFPE)

Resumo

A síntese de novos fármacos tem contribuído para a evolução terapêutica de diversas doenças pelo uso de novas metodologias sintéticas e de estudos relação estrutura-atividade. Os compostos tiazólicos são heterociclos que contêm diversas atividades entre tais anticancerígenas. Nesse contexto o derivado tiazolínico 2,4-dicloro-benzilideno-[4-(4-cloro-fenil)-tiazol-2-il]-amina foi sintetizado e avaliado sua atividade citotóxica frente a quatro linhagens celulares, sendo HEp-2 (derivadas de carcinoma epidermóide de laringe), HT-29 (carcinoma de cólon), NCIH-292 (câncer de pulmão) e MCF7 (carcinoma de mama- humano). O produto apresentou ação citotóxica significante para as células HEp- 2, HT-29 e NCI H-292 Para a linhagem MCF-7 o derivado tiazolínico apresentou discreto poder de inibição celular.

Palavras chaves

atividade citotóxica; derivado tiazolíco; carcinoma

Introdução

O termo câncer é usado para designar a proliferação descontrolada de células, formando tumores. A dispersão dessas células para outras regiões do corpo evidencia metástase, resultante da formação de tumores secundários. O crescente número de casos de câncer humanos que resultam em óbitos tem determinado a busca de novos compostos com atividade antiproliferativa e menos efeito tóxico nos organismos animais. A síntese de novos fármacos tem contribuído para a evolução da terapêutica pelo uso de metodologias sintéticas inovadoras e estudo da relação estrutura-atividade. Diferentes compostos derivados do anel tiazólico têm sido descritos como importantes moléculas pesquisadas, por apresentarem diferentes propriedades biológicas. A literatura descreve tiazóis apresentando ampla gama de atividades, tais como Sulfathiazol (antimicrobiano), ritonavir (medicamento anti-retroviral), Abafungin (antifúngico) e Tiazofurin (antineoplásico). O potencial bioativo dessas moleculas tem sido ampliado com modificações do anel tiazol, contribuindo também para reduzir a toxicidade (Siddiqui et.al., 2009). Os tiazois são compostos heterocíclicos que apresentam um átomo de nitrogênio, outro de enxofre e duas ligações duplas no anel de cinco membros com amplo espectro de atividades tais como: anticâncer, antibacteriana, antidepressiva, anti-inflamatória entre outras (Souza et al., 2005). O tiazol é utilizado como intermediário na fabricação de drogas, fungicidas e de corantes. O anel tiazólico é encontrado naturalmente na vitamina B1 (tiamina) (Siddiqui et.al., 2009). O núcleo tiazólico tem atraído interesse no desenvolvimento de compostos bio-ativos (Bharti et al., 2010). Diante do exposto esse trabalho teve como objetivo sintetizar um novo derivado tiazólico e avaliar sua atividade citotóxica.

Material e métodos

A reação iniciou pela condensação da tiouréia com haleto de fenacila substituído em presença de ácido clorídrico e metanol em banho de óleo a 70 ºC, sob agitação. O composto reagiu por 4 horas. Quantidades equimoleculares de 4-(4- clorofenil)-2-aminotiazol e 2,4-dicloro-benzaldeido dissolvido em metanol e adicionado HCl(conc.). O produto foi cristalizado, pesado, determinado a estrutura química e submetido ao teste em triplica para verificar a citoxicidade in vitro. As linhagens celulares tumorais utilizadas foram: HT29 (carcinoma de cólon-humano), MCF-7 (carcinoma de mama-humano), NCI H-292 (câncer de pulmão– humano) e HL60 (leucemia promielocítica) tendo sido cultivadas em meio RPMI 1640 ou DMEN, suplementados com 10% de soro fetal bovino e 1% de antibióticos, mantidas em estufa a 37 C e atmosfera contendo 5% de CO2. As amostras foram diluídas em DMSO puro estéril e testadas na concentração de 25 µg/mL, Análise de citotoxicidade usou o método do MTT que é uma análise colorimétrica baseada na conversão do sal 3-(4,5-dimetil-2-tiazol)-2,5-difenil-2-H-brometo de tetrazolium (MTT) em azul de formazan, a partir de enzimas mitocondriais presentes somente nas células metabolicamente ativas. O método do MTT permite definir facilmente a citotoxicidade, mas não o mecanismo de ação (BERRIDGE et al., 1996). As células foram plaqueadas na concentração de 1 x 105 células/mL. As substâncias dissolvidas em DMSO foram diluídas no meio RPMI para obtenção das concentrações finais e adicionadas em placa de 96 poços (100 μL/ poço). As placas foram incubadas por 72 horas em estufa a 5% de CO2 a 37 C. Em seguida, foram adicionados 25 L da solução de MTT e as placas reincubadas por 3 horas. A absorbância foi lida em espectrofotômetro de placa a 595nm e analisados no programa GraphPad Prism.

Resultado e discussão

O produto reacional puro apresentou os seguintes resultados: Ponto de Fusão 223- 224 ºC, Rf 0.44 em (0,96:0,04 CHCl3/MeOH). O rendimento foi 23%. Este rendimento foi considerado baixo por isso outras reações estão sendo realizadas com o propósito de melhorar o rendimento. A estrutura química do produto foi determinada por métodos físicos espectroscópicos de RMNH e Infravermelho. O derivado sintetizado avaliado revelou variação na atividade inibitória da citotoxidade a partir do percentual de inibição revelado, e que sofreu variação de acordo com as especificidades de cada linhagem das células testadas. O Percentual de inibição do crescimento celular (IC%) das amostras em quatro linhagens tumorais testadas na dose única de 25 µg/mL revelou ação citotóxica significante para três das quatro linhagens testadas, sendo estas: HEp-2 (derivadas de carcinoma epidermóide de laringe), HT29 (carcinoma de cólon- humano) e NCI H-292 (câncer de pulmão–humano), variando entre 82% e 98%. Para a linhagem MCF-7 (carcinoma de mama-humano) o 2,4-dicloro-benzilideno-[4-(4-cloro- fenil)-tiazol-2-il]-amina apresentou discreto potencial inibitório de 40%. Essa variação de resultados pode representar baixa citotoxicidade para células sadias. Os resultados preliminares sugerem a continuidade do estudo para calcular a CI50 e determinar a curva em diferentes concentrações testadas aplicando o cálculo estatístico da reta de regressão relacionando o percentual de inibição em função da concentração logarítma em todas as concentrações verificadas para os diferentes tipos de linhagens celulares. Também Por meio desse estudo foi possível verificar um percentual de inibição celular promissor sugerindo atividade antiproliferativa destes compostos e a continuidade do estudo na mesma série de compostos.

Estrutura do derivado tiazolínico 2,4-dicloro- benzilideno-[4-(4-cloro-fenil)-tiazol-2-il]-amina

Conclusões

A estrutura química do composto foi confirmada por métodos espectroscópicos de RMNH, Infravermelho e massa. O teste foi feito em triplicata e analisado pela média e desvio padrão. O produto apresentou ação citotóxica significante para células HEp-2 (carcinoma epidermóide-laringe) HT29 (carcinoma de cólo) e NCI H-292 (câncer de pulmão), variando entre 82% e 98%. Para a linhagem MCF-7 (carcinoma de mama) houve apenas uma discreta inibição de 40%. Para avaliação do resultado foi considerado o parâmetro amostras usados na literatura internacional. A inibição de 70 a 100% foi considerada boa.

Agradecimentos

Ao PIBIC/CNPq/UFPE pelo apoio dado. Ao Departamento de Qúimica Fundamental da UFPE pelos espectros realizados.

Referências

BHARTI, S. K.; NATH, G.; TILAK, R.; SINGH, S. K.. Synthesis, anti-bacterial and anti-fungal activities of some novel Schiff bases containing 2,4-disubstituted thiazole ring. European Journal of Medicinal Chemistry. 45, 651–660, 2010.

SIDDIQUI, N.; ARSHAD, M. F.; AHSAN, W.; ALAM, M. S.. A Valuable Insight into the Recent Advances and Biological Activities. International Journal of Pharmaceutical. Sciences and Drug Research; nº 3, 136-143, 2009.

SOUZA, M. V. N.; FERREIRA, S. B.; MENDONÇA, J. S.; COSTA, M. e REBELLO, F. R.. Métodos de obtenção e aplicações sintéticas de tiazois: uma importante classe de compostos heterocíclicos. Quimica Nova, nº 1, 77-84, 2005.