Realizado no Rio de Janeiro/RJ, de 14 a 18 de Outubro de 2013.
ISBN: 978-85-85905-06-4
ÁREA: Produtos Naturais
TÍTULO: AÇÃO DE EXTRATOS ORGÂNICOS DE Protium hebetatum D. C. DALY CONTRA MICRO-ORGANISMOS DE INTERESSE MÉDICO
AUTORES: Galdino Conrado, G. (UNIVERSIDADE DO ESTADO DO AMAZONAS) ; Guilhon Simplicio, F. (UNIVERSIDADE FEDERAL DO AMAZONAS) ; Regina Carim da Costa, K. (UNIVERSIDADE FEDERAL DO AMAZONAS) ; Barbosa Sampaio, P.T. (INSTITUTO NACIONAL DE PESQUISA DA AMAZÔNIA)
RESUMO: Protium hebetatum pertence à família Burseraceae, é uma espécie arbórea encontrada
no Norte do Brasil, no Peru e na Venezuela. Considerando a urgência na busca de
novas drogas para o tratamento de infecções bacterianas, o objetivo deste trabalho
foi realizar um screening fitoquímico e um screening de atividade antibacteriana
de extratos orgânicos de folhas e galhos contra bactérias de interesse médico.
Triterpenos, flavonoides e cumarinas, foram alguns dos constituintes detectados na
espécie, os quais têm despertado um grande interesse nos últimos anos em razão da
comprovação de inúmeras atividades terapêuticas. No screening biológico, o extrato
metanólico dos galhos se destacou por apresentar halos de inibição de 13 mm contra
Escherichia coli ATCC-25922 e Proteus vulgaris CCCD-P002.
PALAVRAS CHAVES: Protium hebetatum; screening antibacteriano; screening fitoquímico
INTRODUÇÃO: O gênero Protium, que tem cerca de 140 espécies, é o maior e mais heterogêneo da
família Burseraceae, ocorrendo predominantemente em florestas neotropicais.
Espécies dessa família são caracterizadas por exsudar resinas e são popularmente
conhecidas como “breus”. Na região Amazônica estas resinas são comercializadas
nos mercados com diversos propósitos e na medicina popular são utilizadas como
anti-inflamatórios, analgésicos, expectorantes, cicatrizantes e como repelente
de insetos (BANDEIRA et al., 2002).
A resistência bacteriana é considerada um problema de saúde pública mundial. Nos
últimos anos, o aumento da resistência bacteriana a multiplas drogas diminuiu
intensamente as alternativas terapêuticas para o tratamento de patologias
causadas por cepas resistentes. Diante disto, a busca por novos agentes
antibacterianos a partir de fontes naturais cresceu consideravelmente e as
plantas medicinais estão entre os produtos naturais de grande interesse
científico devido à possibilidade de se obter moléculas bioativas graças à
diversidade de seus constituintes (SILVA et al., 2013).
Muitas pesquisas científicas comprovam que as plantas apresentam amplo espectro
de atividade e inibição contra diversas bactérias. Sendo assim, este estudo
realizou uma triagem fitoquímica para identificar as classes de metabólitos
secundários presente na espécie Protium hebetatum e uma investigação de
atividade antibacteriana de extratos orgânicos de folhas e galhos de frente a um
painel de bactérias de interesse médico.
MATERIAL E MÉTODOS: Folhas e galhos de [P.][hebetatum] foram coletados na Reserva Florestal Adolpho
Ducke, Manaus – AM. A espécie foi identificada pelo Dr. Mike Hopkins do Herbário
do INPA, onde foi depositada a exsicata sob o número 251969. As amostras foram
secas e pulverizadas em moinho de facas e submetidas à extração pelo método de
sonicação com solventes de polaridade crescente (hexano, acetato de etila e
metanol), sendo então concentrados em evaporador rotativo com pressão reduzida,
à temperatura de 45ºC. O volume residual do solvente foi evaporado em capela de
exaustão, em temperatura ambiente. Foram investigados a presença de compostos
fenólicos, naftoquinona, flavonóides, taninos, cumarinas, triterpenos e
esteróides, heterosídeos cardiotônicos e saponinas pela metodologia de
Matos(1997). A presença de alcaloides foi investigada pela metodologia de Costa
(2001). Um screening da atividade antibacteriana dos extratos (hexano, acetato
de etila e metanol) das folhas e galhos de P. hebetatum foi realizado em
triplicata pelo método de difusão em ágar utilizando a técnica proposta pelo
Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI, 2009). Os extratos foram
testados na concentração de 4mg/mL frente às bactérias Enterococcus faecalis
CCCD-E002, Escherichia coli ATCC-25922, Klebsiella pneumoniae CCCD-K003,
Salmonella entérica CCCD-S001, Staphylococcus aureus ATCC-25923, Streptococcus
pyogenes CCCD-S012, Proteus vulgaris CCCD-P002, Pseudomonas aeruginosa ATCC-
27853. A gentamicina na concentração de 10 µg/mL foi utilizada como controle
positivo e o dimetilssulfóxido (DMSO) como controle negativo. A atividade
antibacteriana foi determinada pela mensuração do halo de inibição (mm) e
analisada como segue: inativo (< 9mm), pouco ativo (9-12mm), ativo (13-18mm) e
muito ativo (>18mm).
RESULTADOS E DISCUSSÃO: O resultado da prospecção fitoquímica P. hebetatum está apresentado na tabela
01.
Dentre as classes de metabólitos presente na espécie, destaca-se a classe dos
triterpenos, constituintes que têm despertado um grande interesse nos últimos
anos em razão da comprovação de inúmeras atividades terapêuticas, tais como:
anticâncer, anti-inflamatório, antiviral, antibacteriano, antifúngico,
antidiurético, giardicida e inibidores da enzima acetilcolinesteras (BARBOSA-
FILHO et al., 2007). Destacam-se também a presença dos flavonoides, classe
responsável por ação antitumoral e antioxidante, podendo ainda agir como
antiviral, anti-inflamatório e antimicrobiano e a classe das cumarinas,
substâncias com ação anticoagulante e antimicrobiana (SIMÕES et al., 2007).
O extrato metanol dos galhos foi ativo frente a E. coli e P. vulgaris. Para K.
pneumoniae, S. entérica e E. faecalis o extrato foi pouco ativo e inativo para
S. aureus, P. aeruginosa e S. pyogenes. Este resultado pode está relacionado com
a presença das classes de flavonoides e cumarinas possivelmente extraídas devido
a afinidade dessas substâncias com a polaridade do solvente. Os outros extratos
foram inativos contra todos os micro-organismos testados como pode ser observado
na tabela 02. Este é o primeiro estudo em que uma espécie do gênero Protium é
testada contra esses micro-organismos. Dada à urgência de novas drogas outras
espécies devem ser investigadas, uma vez que o gênero é rico em terpenoides.
Tabela 01. Tabela referente à prospecção fitoquímica de galhos e folha
Tabela 02. Atividade antibacteriana dos extratos de galhos e folhas de
(-) não foi observado halo de inibição.
(a) Extratos testados
(b) Microrganismos testados
CONCLUSÕES: A espécie P. hebetatum apresenta classes de substâncias responsáveis por inúmeras
atividades terapêuticas e deve ser investigada quanto ao seu potencial
farmacológico. Quanto ao screening antibacteriano, o extrato metanólico dos galhos
apresentou atividade antibacteriana que será quantificada através do ensaio de
microdiluição em caldo. Um fracionamento biomonitorado do extrato bruto está sendo
realizado para verificar se uma substância isolada é responsável por esta
atividade ou se esta se deve a uma ação sinérgica entre os compostos presentes.
AGRADECIMENTOS: Os autores agradecem ao INPA, UFAM, UEA e a FAPEAM.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICA: BANDEIRA, P. N.; PESSOA, O. D. L.; TREVISAN, M. T. S.; LEMOS, T. L.G. Metabólitos secundários de protium heptaphyllum March. Química Nova, v.25, n.6B, p. 1078-1080, 2002.
BARBOSA-FILHO J.M.; NASCIMENTO-JÚNIOR F.A.; TOMAZ A.C.A.; ATHAYDE-FILHO P.F.; SILVA M.S.; CUNHA E.V.L.; SOUZA M.F.V.; BATISTA L.M.; DINIZ M.F.F.M. Natural products with antileprotic activity. Rev Bras Farmacogn 17, p 141- 148. 2007.
CLSI. Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria That Grow Aerobically; Approved Standard—Sixth Edition. CLSI document M7-A6 (ISBN 1- 56238-486-4). CLSI, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania 19087- 1898 USA. 2009.
COSTA, A. F. Farmacognosia: Farmacognosia experimental. 3. ed., v. 3. Lisboa: Fundação Calouste Gulbenkian, 2001.
MATOS, F. J. Introdução à fitoquímica experimental. 2. ed. Fortaleza: Edições UFC, 1997.
OLIVEIRA R.A.G.; LIMA E.O.; SOUZA E.L.; VIEIRA W.L.; FREIRE K.R.L.; TRAJANO V.N.; LIMA I.O.; SILVA-FILHO R.N. Interference of Plectranthus amboinicus (Lour.) Spreng essential oil on the anti-Candida activity of some clinically used antifungals. Rev Bras Farmacogn 17, p 186-190, 2007.
SILVIA, M.E.L.C.; AMORIM, T.J.S.; PEIXOTO, S.A. M. SARAIVA, M.N.C.; PISCIOTTANO, C.N.A; JOSE A.T.; SOLANGE I.M. Antibacterial activity of crude methanolic extract and fractions obtained from Larrea tridentata leaves. Industrial Crops and Products 41 p. 306– 311. 2013.
SIMÕES, C. M. O. (Org.). Farmacognosia: da planta ao medicamento. 6. ed. Porto Alegre: Editora da UFRGS, 2007.