Realizado no Rio de Janeiro/RJ, de 14 a 18 de Outubro de 2013.
ISBN: 978-85-85905-06-4
ÁREA: Química Analítica
TÍTULO: Uma Abordagem original sobre aplicação da cromatografia liquida de alta eficiência acoplada a arranjo fotodiodos para identificação de oxitetraciclina em medicamentos veterinários
AUTORES: Cabral, A.M. (UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO NORTE) ; de Moura, M.F.V. (UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO NORTE) ; da Silva, D.R. (UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO NORTE)
RESUMO: Este trabalho relata uma análise preliminar para investigação de Oxitetraciclina
em medicamentos veterinários, pois o uso desta substância é constante em
caprinos e bovinos produtores de leite, chegando a 34 % sua administração
comparada às outras soluções injetáveis. Inicialmente, foi realizado a otimização
das condições cromatográficas, ficando estabelecido o método que fornece o menor
tempo de retenção e melhor resolução do pico. Os resultados encontrados mostraram
que o HPLC-DAD é adequado para identificação da oxitetraciclina, considerando os
limites máximos de resíduos (LMR) estabelecidos pelo Plano Nacional de Resíduos e
Contaminantes (PNCRC) de 2010 do Ministério da Agricultura Pecuária e
Abastecimento do Brasil para os antimicrobianos (100 ng/mL).
PALAVRAS CHAVES: Oxitetraciclina; HPLC-DAD; PNCRC
INTRODUÇÃO: A oxitetraciclina (OTC) é uma substância do grupo das tetraciclinas é isolada a
partir da Streptomyces rimosus. Estes antibióticos são amplamente
usados no tratamento de mastites em bovinos e caprinos e são adicionados, em níveis terapêuticos, na ração animal para fins profiláticos (SCHENCK & CALLERY, 1998; BRITO; NOBRE; FONSECA, 2009). Porém, o uso inadequado de medicamentos veterinários gera resíduos nos produtos derivados, podendo provocar efeitos tóxicos, como reações alérgicas e choque anafilático, em consumidores (BOHM, STACHEL & GOWIK., 2009;BANDO et al., 2009.; BERENDSEN et al., 2010; LOPEZ et al., 2008; SHERIDAN et al., 2008; GOMES & DEMOLY., 2005; RAISON-PEYRON et al., 2001). Há inúmeros métodos para análise de Tetraciclinas, que vem sendo relatados para monitorar resíduos em alimentos. A cromatografia liquida (BALIZS; HEWITT, 2003; STOLKER; BRINKMAN, 2005; RIEDIKER et al, 2001; RAMBLA-ALEGRE, et al 2011), eletroforese capilar (LARA et al, 2006), cromatografia liquida acoplada a arranjo de fotodiodos UV, (GARCIA-MAYOR, et al 2006; CHRISTODOULOU; SAMANIDOU, 2007), detecção fluorimétrica (RODRIGUEZ-DIAZ et al, 2006) eletroquimioluminescência (GUO; GAI,2011) e métodos espectroscópicos (EL-DIENA et al, 2010) vêm sendo mais recomendados para detecção simultânea de antibióticos no leite que tem a finalidade de detectar de detectar antibióticos abaixo de seu limite máximo de resíduos (LMR) validado de acordo da Comissão Européia 2002/657/CE (EC, 1993). No Brasil o Plano Nacional de Controle de Resíduos e Contaminantes em Produtos de Origem Animal (PNCRC) desempenha esta função (MAPA, 2007, 2011). Desta forma, este trabalho realiza a identificação da oxitetraciclina com objetivo de realizar um estudo preliminar com soluções injetáveis utilizando HPLC-DAD.
MATERIAL E MÉTODOS: PREPARO DAS SOLUÇÕES: PROCEDIMENTO DA FARMACOPÉIA AMERICANA (USP XXVIII, 2005)
A partir de uma solução(dihidratada) de 200 mg/mL de oxitetraciclina foi preparado
por adição de padrão externo uma solução de 0,5 mg/mL diluída em água milipore® Milli Q (resistividade > 16 MΩ). As soluções foram filtradas em filtro de seringa de nylon Milipore 13 mm x 0,45 µm.
OTIMIZAÇÃO DAS CONDIÇÕES DA ANÁLISE CROMATOGRÁFICA
As análises foram realizadas em sistema cromatográfico UFLC SHIMADZU®, Modelo
LC-20 da Shimadzu. O modo de injeção da amostra por loop com limite 5µL coluna de fase reversa de C8 (4,6 mm x 25 cm, 5 μm). A eluição binária consistiu de fase A (água MiliQ 80 %) e fase B (acetonitrila grau HPLC) 20 % . Com as bombas desgaseificadas o fluxo da coluna era 2 mL/min, a temperatura foi de 40 °C. O detector utilizado foi com arranjo de foto diodos, o comprimento de onda foi selecionado de acordo com o máximo de absorbância para cada família de
antimicrobianos, sendo que para é de 270 nm, 270 nm referenciado, de maneira que medido foi de 203, 266 e 358 nm. Os sinais foram coletados pelo software
LCSolution da Shimadzu®.
RESULTADOS E DISCUSSÃO: Inicialmente, é necessário relatar que o comércio de antimicrobianos de uso veterinário é realizado de forma aleatória e sem obrigatoriedade de receituário de médico veterinário para efetuação de compras desses medicamentos. De maneira que, contou-se com a colaboração da Escola Agrícola de Jundaí (EAJ/UFRN) para fornecimento de informações relevantes com relação à freqüência da utilização dos antimicrobianos de uso veterinário nos mamíferos (bovino e caprino). Os resultados mostraram a distribuição dos medicamentos mais utilizados que são as tetraciclinas injetaveis via intramuscular dentre elas está oxitetraciclina com 34% de frequência cuja posologia deste medicamento é conforme o grau da enfermidade (Figura 1). Da análise cromatográfica levou-se em consideração, inicialmente, a escolha da coluna cromatográfica referenciadas pela literatura como as utilizadas com freqüência na identificação de antibióticos da classe da tetraciclina que são de sílica de fase reversa C8 ou C18. No estudo apresentado foram testadas diversas composições e fluxos das fases móveis, baseados e adaptados do trabalho de Wang e Li 2009. Diante da otimização das condições metodológicas expressos pelo método 1 e método 2 representado pela Figura 2 , sendo considerado o método 2, referência, pois apresentou melhor tempo de retenção (tr), de maneira que, os resultados mostraram boa resolução do pico de oxitetraciclina em tempo satisfatório obtido utilizando o método United States Pharmacopeial Convention (USP XXVIII, 2005)adaptado para o sistema cromatográfico UFLC-UV para padronização externa.
Freqüência de utilização de antimicrobianos
Nesta Figura são apresentados dados reais da freqüência e utilização dos medicamentos veterinários
Análise e Planejamento das Condições Cromatográficas
Nesta Figura são apresentadas as melhores condições otimizadas para o sistema cromatográfico.
CONCLUSÕES: A identificação da oxitetraciclina em soluções injetáveis de antimicrobianos de uso veterinário tem sido um treinamento a fim de implantar metodologia que a necessidade de investigação da permanência dos resíduos, desses medicamentos em alimentos expostos ao consumo humano, como forma de garantia da segurança dos alimentos, bem como da certificação do controle da manipulação e regulamentação do comércio, dessas drogas de uso veterinário. O estudo preliminar dessas amostras por cromatografia liquida de alta eficiência com arranjo de fotodiodos, por ser uma técnica de separação seletiva, mostrou a presença de OTC em bons tempos de retenção.
AGRADECIMENTOS: Os autores agradecem a Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) e Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN).
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