Realizado no Rio de Janeiro/RJ, de 14 a 18 de Outubro de 2013.
ISBN: 978-85-85905-06-4
ÁREA: Química Analítica
TÍTULO: APLICAÇÃO DO REATIVO LUMINOL PARA DETECÇÃO DE SANGUE EM SUPORTES DIVERSOS DE INTERESSE FORENSE
AUTORES: Cutrim, C. (LABORATÓRIO DE ANÁLISE FORENSE - ICRIM/MA) ; Chagas, J.W. (UNIVERSIDADE FEDERAL DO MARANHÃO - UFMA)
RESUMO: Na área forense a pesquisa de sangue envolve testes presuntivos que possuem
grande
sensibilidade e baixa especificidade. O luminol é o reagente utilizado para
pesquisa de manchas latentes, mas muitos interferentes encontrados em locais de
crime exigem uma análise minuciosa dos padrões de luminescência, bem como exames
complementares das manchas. Avaliou-se a quimiluminescência do luminol e
Bluestar®
na detecção de vestígios de sangue em diferentes diluições e superfícies, e em
contato com interferentes da reação, comparado a outros testes presuntivos. A
aplicação do luminol e Bluestar® em superfícies não absorventes mostrou menor
índice de luminescência. O Bluestar® é mais intenso que o luminol e não exige
escuridão para a sua visualização. Porem apresenta mesma sensibilidade do
luminol.
PALAVRAS CHAVES: química forense; hematologia forense; luminol
INTRODUÇÃO: O sangue é um dos vestígios mais procurados em locais de crime por estar
associado a crimes de impacto. Entretanto há casos em que as manchas de sangue
não são evidentes. Na triagem laboratorial para detecção de sangue são
utilizados testes sensíveis, de baixa especificidade, denominados testes de
presunção e que geralmente baseiam-se na reação do indicador com a hemoglobina.O
grupo heme da hemoglobina é formado pelo complexo de coordenação em que o ferro
encontra-se como o íon central, associado a quatro anéis pirrólicos de
nitrogênio. É nesse sítio ativo que o íon ferro sofre a ação do agente oxidante
utilizado nos testes presuntivos para a detecção de sangue. Os principais
métodos colorimétricos envolvem as reações com a benzidina, a fenolftaleína e o
luminol. Este último, é caracterizado pela reação de quimiluminescência e
indicado em especial para casos de revelação de manchas latentes. A luz
produzida pela oxidação do luminol depende de vários fatores, como o pH,
temperatura, espécies reativas que podem estar presentes na solução, metais
catalisadores, íons hidróxido ou agentes oxidantes utilizados. Alguns compostos
podem influenciar nas metodologias que envolvem o luminol, como metais, suco
gástrico, peroxidases, hipoclorito e etc. Outro importante parâmetro de
avaliação são os suportes utilizados para a detecção de manchas. As superfícies
absorventes são capazes de preservar as propriedades do sangue e podem
permanecer apropriados para detecção por muitos anos, sendo a reação de
positividade pelo uso do luminol mais intensa.
Diante das manchas de sangue latentes analisadas em laboratórios forenses,
avaliou-se a detecção dos reagentes luminol e Bluestar®, em diversos
contaminantes, suportes e diluições de sangue, frente a outros testes
colorimétricos.
MATERIAL E MÉTODOS: III-A) Diluição das amostras:
Coleta de sangue por punção venosa submetida a catorze diluições em água
destilada: 1:10; 1:100; 1:1000; 1:5000; 1:10000; 1:50000; 1:100000; 1:1000000;
1:100000000; 1:1000000000; 1:1500000000; 1:2000000000, aplicados no período
semanal de quatro semanas
do experimento.
III-B) Extratos:
Foram obtidos extratos hidroalcoólicos (50%) de açaí, beterraba, cebola roxa,
repolho roxo, ameixa, framboesa, alface roxa e vinagreira. Também foram
utilizados os extratos de limão, suco de batata e suco em pó, aplicados na
terceira semana do experimento.
III-C) Reagentes:
Luminol, marca Sirchie, contendo os reagentes perborato de sódio, carbonato de
sódio e 3-aminoftalhidrazida (solução de Grodsky).
Bluestar® Forensic Tabletes, contendo os reagentes hidróxido de sódio e peróxido
de hidrogênio.
Ambos os reagentes foram aplicados na quarta semana do experimento.
III-D) Suportes:
-Placas de vidros: aplicação dos extratos, metais de transição CuSO4, KMnO4 e
FeSO4 e as amostras sangue + detergente; sangue + hipoclorito; sangue +
detergente + hipoclorito, com ou sem a adição de sangue aplicados na terceira
semana do experimento.
- Suportes diversos: sangue na diluição 1:100 nos suportes telha, mármore,
madeira, isopor, luva de vinil, papelão, bisturi, com ou sem a adição de sangue
e moeda e bisturi sem a adição de sangue aplicados na terceira semana do
experimento.
III-E) Aplicação dos reagentes fenolftaleína e benzidina: foram aplicadas nas
amostras de sangue com diluições 1:10; 1:100; 1:1000; 1: 5000, após a
aplicação do luminol e Bluestar®.
RESULTADOS E DISCUSSÃO: Tabela 1: Aplicação dos reagentes luminol e Bluestar® em manchas de sangue com
diferentes diluições.
Diluições das amostras de sangue Resultado
1ª Semana 2ª Semana 3ª Semana 4ª Semana
1:10 + + + +
1:100 + + + +
1:1000 + + + +
1: 5000 + + + +
1:10000 + + + +
1:50000 + + + +
1:100000+ + + +
1:1000000+ + + +
1:1000000000+ + + -
1:1.5000000000+ + + -
1:2000000000 - - - -
Tabela 2: Aplicação do luminol e Bluestar® em diferentes extratos
Substâncias Resultado
açaí -
beterraba +
cebola roxa +
repolho roxo -
ameixa +
framboesa +
alface roxa +
vinagreira +
limão -
suco de batata +
suco em pó +
CuSO4 (1:10) +
KMnO4 (1:10) +
FeSO4 (1:10) +
Sangue + detergente +
Sangue + hipoclorito +
Sangue + detergente + hipoclorito +
Tabela 3: Aplicação do luminol e Bluestar® em diferentes suportes.
Amostra de sangue (1:100) Resultado
Telha +
Mármore +
Madeira +
Isopor +
Luva de vinil +
Bisturi +
Papelão +
Tabela 4: Aplicação da fenolftaleína e benzidina após o uso do luminol e
Bluestar ® .
Fenolftaleína Benzidina
Diluição Resultado Diluição Resultado
1:10 + 1:10 +
1:100 + 1:100 +
1:1000 - 1:1000 -
1: 5000 - 1: 5000 -
A aplicação do luminol e Bluestar® em diversas diluições aplicadas em superfície
não porosa apresentou diluição da mancha com escoamento. Porém, não interferiu
nos testes colorimétricos exceto pela diluição da mancha. O Bluestar ®
apresentou maior intensidade e tempo de reação, sem a completa escuridão do
local,conforme estudos de WATKINS & BROWN, 2006. Os resultados positivos para
extratos vegetais ocorreram devido a presença de peroxidases e íon Fe.
Resultados negativos encontrados no extrato de limão decorreu pela presença de
ácido ascórbico, agente oxidante interferente. A reação com o hipoclorito foi
mais intensa e rápida.
CONCLUSÕES: Sensibilidade do luminol ou Bluestar® de 1:1000000000 para a detecção de sangue.
Resultado positivo na presença de suco de batata, beterraba, suco em pó, cebola roxa, ameixa, framboesa, alface roxa e vinagreira.Forte luminescência na presença dos metais de transição.Picos rápidos e intensos de luminescência na presença de hipoclorito. Padrões de luminescência mais definidos observados nas superfícies porosas. Maior intensidade e duração da luminescência produzida pelo Bluestar®.Resultado positivo em testes colorimétricos para a presença de sangue após o uso do luminol e Bluestar.
AGRADECIMENTOS: Ao Laboratório de Análises Forenses do ICRIM-MA.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICA: CHEMELLO, E. Ciência forense: manchas de sangue. Química virtual, p. 01-11, jan. 2007.
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