52º CBQ - FENÓIS TOTAIS E ATIVIDADE ANTIOXIDANTE DE EXTRATOS DE ESPÉCIES DE PROTIUM DA AMAZÔNIA BRASILEIRA

ÁREA: Produtos Naturais

TÍTULO: FENÓIS TOTAIS E ATIVIDADE ANTIOXIDANTE DE EXTRATOS DE ESPÉCIES DE PROTIUM DA AMAZÔNIA BRASILEIRA

AUTORES: Ribeiro, E.M. (ICET/UFAM) ; Veiga Junior, V.F. (ICE/UFAM) ; Siani, A.C. (FIOCRUZ) ; Lima, E.S. (FCF/UFAM) ; Lima, A.S. (FCF/UFAM) ; Oliveira, P.A. (ICE/UFAM) ; Guimaraes, A.C. (ICET/UFAM)

RESUMO: Protium é o gênero mais representativo da família Burseraceae que corresponde a 10% das espécies arbóreas da Amazônia. Este trabalho avaliou o teor de fenóis totais e a atividade antioxidante de extratos etanólicos das folhas de quatro espécies de Protium coletadas na Amazônia. O teor de fenóis totais utilizando o método Folin-Ciocalteau indicou que o teor de fenóis nos extratos variou entre 144,32 e 5,72 mg EAG/g de extrato. O ensaio de atividade antioxidante pelo DPPH (2,2-Difenil-1-picril-hidrazila), determinou que todos os extratos foram mais efetivos em inibir o radical livre que o padrão rutina. As concentrações de CS50 variaram entre 4,451 e 6,117 µg/mL. O extrato P. paniculatum teve a maior atividade e o extrato de P. trifoliolatum apresentou menor atividade.

PALAVRAS CHAVES: fenóis totais; Protium; antioxidante

INTRODUÇÃO: Os compostos fenólicos são metabólitos secundários bastante estudados devido importantes atividades biológicas, tais como a atividade antioxidante, anti-inflamatória e inibidora de enzimas. A atividade antioxidante tem sido descrita, como parte do mecanismo de proteção natural dos vegetais nos processos de oxidação, usado na proteção contra microrganismos e insetos, o chamado EROs, “Espécies Reativas de Oxigênio”. O consumo de substâncias antioxidantes em humanos tem sido relacionado com a inibição dos processos de inflamação, câncer e proteção do sistema imunológico (SOUZA, 2007). O gênero Protium é o principal gênero de Burseraceae da região amazônica que, apesar dos indícios, poucos estudos têm sido realizados para avaliar a presença de fenólicos nos seus extratos e suas atividades biológicas (GUIMARÃES, 1997; RÜDIGER, 2007). O objetivo deste trabalho é quantificar o teor de fenóis totais e atividade antioxidante através da metodologia do DPPH dos extratos etanólicos de quatro espécies de Protium da Amazônia Brasileira.

MATERIAL E MÉTODOS: As folhas de Protium klugii (PKL), P. rubrum (PRU), P. paniculatum (PPA), P. trifoliolatum (PTR) foram coletadas na Reserva Florestal Adolpho Ducke e após limpeza e secagem do material, foram extraídas com etanol em aparelho de Soxhlet. A quantificação do teor de fenóis totais foi realizada seguindo a metodologia do método Folin-Ciocalteu. Os extratos foram pesados e diluídos em etanol (1,5 mg/mL). Aplicou-se uma alíquota de 10 µL do extrato diluído, 50 µL do reagente Folin e 240 µL de carbonato de sódio em microplaca. Após 8 minutos, fez-se a leitura no leitor de ELISA a 620nm. O procedimento foi realizado em triplicata e utilizou-se ácido gálico como padrão. O teor foi calculado em miligramas de equivalentes de ácido gálico (EAG) a partir da equação y = 0,8997x + 0,163, R² = 0,9364 obtida a partir da curva de calibração do ácido gálico. A dosagem de atividade antioxidante foi obtida através do método do radical livre DPPH (2,2-difenil-1-picrilidrazila), onde uma solução de 0,3mM de DPPH em metanol foi utilizada junto com soluções de extratos diluídos em metanol a concentrações de 50, 25, 12.5, 6.25, 3.125, 1.562, 0.781 e 0.390 µg/mL. As seguintes soluções foram preparadas como controles: extrato em metanol (branco positivo) e DPPH em metanol (branco negativo). O flavonóide rutina foi utilizado como padrão. O teste foi realizado em microplaca e, trinta minutos após a adição de DPPH, fez-se a leitura em espectrofotômetro a 515nm. As leituras foram feitas em triplicata. Calculou-se a capacidade de redução de 50% do radical (CS50).

RESULTADOS E DISCUSSÃO: O extrato de PRU apresentou maior rendimento (13,20%) seguido dos extratos de PPA, PKL e PTR com 7,45; 6,07 e 2,95%. Os resultados do ensaio de quantificação do teor e fenóis totais estão descritos na tabela 1. Os teores de fenóis totais variaram entre 144,32 e 5,72 mgEAG/g de extrato. O extrato PRU apresentou maior teor de fenóis totais com 144,32 mgEAG/g de extrato, seguido dos extratos de PTR, PKL e PPA com 57,07; 18,00 e 5,72mgEAG/g de extrato.O ensaio de atividade antioxidante baseia-se na redução de radicais DPPH na presença de substâncias que podem ceder um átomo de hidrogênio. Os resultados estão expressos na tabela 2. Neste ensaio, o extrato de PPA foi o extrato que reduziu o radical em menor concentração (CS50=4,451±0,321 µg/mL) seguido dos extratos de PKL (4,829±1,414 µg/mL), PRU (5,771±0,104 µg/mL) e PTR (6,117±0,960 µg/mL). Em diversos estudos, a atividade antioxidante vem sendo relacionada à presença de fenólicos e atua como parte do mecanismo de proteção natural dos vegetais nos processos de oxidação e contra as espécies reativas de oxigênio (EROs). Em excesso, as EROs ultrapassam a ação de antioxidantes endógenos do organismo causando danos em estruturas celulares como o DNA, proteínas e lipídios. Esses danos podem causar doenças como as cardiovasculares, diabetes e outros (PIETTA, 2000). O consumo de substâncias antioxidantes, como isoflavonas da soja, ácido ascórbico e β-caroteno, por humanos tem sido relacionado com a inibição de processos patológicos crônicos (SOUSA et al, 2007). O potencial antioxidante observado para os extratos poderá contribuir com os estudos da família Burseraceae e no desenvolvimento de produtos com aplicação em saúde.

Tabela 1

Teor de Fenóis Totais de Extratos de Protium em miligramas de equivalentes de ácido gálico/grama de extratp (mg EAG/G de extrato)

Tabela 2

Capacidade de Ssequestro de extratos de Protium frente o radical livre DPPH (micrograma/mL)

CONCLUSÕES: O teor de fenóis nos extratos variou entre 144,32 e 5,72mg EAG/g de extrato, comparável a resultados obtidos em estudos de outras espécies da família Burseraceae (Surveswaran et al, 2007). A atividade antioxidante determinou que todos os extratos foram mais efetivos em inibir o radical livre DPPH que o padrão rutina. As concentrações de CS50 variaram entre 4,451 e 6,117µg/mL. O extrato de PPA apresentou a maior atividade antioxidante e o extrato de PTR apresentou a menor atividade. Comparando com a literatura (MENSOR et al, 2001), todos os extratos analisados apresentaram excelente atividade.

AGRADECIMENTOS: A Fundação de Amparo à Pesquisa no Estado do Amazonas – FAPEAM pela bolsa concedida.

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICA: GUIMARÃES, A.C.. Estudo Químico e Avaliação Biológica das Folhas de Protium strumosum, P. grandifolium, P.llevelyni e P.altsonii, Dissertação de Mestrado. Universidade do Amazonas, Manaus, Brasil, 1997, 98p.
MENSOR, L. L.; MENEZES, F. S.; LEITÃO, G. G.; REIS, A. S.; dos SANTOS, T. C.; COUBE, C. S.; LEITÃO, S. G. Screening of Brazilian plant extracts for antioxidant activity by the use of DPPH free radical method. Phytotherapy research, 2001, v.15, p.127-130.
MORETONI, C.B.; Avaliação fitoquímica e das atividades antioxidante, citotóxica e hipoglicemiante dos frutos de Cucumis anguria L. (Cucurbitaceae); Dissertação de Mestrado; Universidade Federal do Paraná; Curitiba: 2007.
PIETTA, P.G.; Flavonoids as Antioxidants. Journal of Natural Products. 2000. v.63, p. 1035-1042.
RÜDIGER, A.L.; SIANI, A.C.; VEIGA JUNIOR, V.F. The Chemistry and Pharmacology of South America genus Protium Burm.f. (Burseraceae). Pharmacognosy Reviews. 2007, v.1 n.1. p.93-104.
SOUSA, C. M. de M.; SILVA, H. R.; VIEIRA-Jr, G. M.; AYRES M. C.C.; da COSTA C. L. S.; ARAÚJO, D. S.; CAVALCANTE L. C. D.; BARROS E. D. S.; ARAÚJO P. B. M.; BRANDÃO M.S.; CHAVES M.H. Fenóis totais e atividade antioxidante de cinco plantas medicinais. Química Nova, 2007, v.30, n.2, p.351-355.
SURVESWARAN, S.; CAI, Y.; CORKE, H.; SUN, M.; Systematic evaluation of natural phenolic antioxidants from 133 Indian medicinal plants. Food Chemistry. 2007. V. 102. p.938–953.