52º CBQ - Investigações por Espectrofotometria em Preparações de Folhas de Euphorbia hirta L. Quanto à Presença de Lectina.

ÁREA: Produtos Naturais

TÍTULO: Investigações por Espectrofotometria em Preparações de Folhas de Euphorbia hirta L. Quanto à Presença de Lectina.

AUTORES: Costa, J.A. (UFPE-CAA) ; Silva, D.G.R. (UFPE-CAA) ; Nascimento, K.T.O. (UFPE-CAA) ; Freitas, M.R.V. (UFPE-CAA) ; Silva, J.M. (UFPE-CAA) ; Sá (pq), R.A. (DEPTO. DE BIOQUÍMICA, CCB, UFPE, PE, BRASIL.)

RESUMO: Lectinas apresentam ação contra insetos e fungos. O isolamento destas proteínas é interessante pela sua vasta aplicação, como pela sua atuação em biotecnologia. O objetivo neste trabalho é detectar e extrair produtos naturais (lectinas) das folhas de Euphorbia hirta L.(popularmente conhecida como Erva-de-Santa-Luzia) e determinar o melhor líquido extrator para estes bioativos. O processo de extração,inicou-se com soluções de todos os tampõesdeixando em contato com o pó da folha em agitação exaustiva durante 4 horas, em seguida foi feita a atividade hemaglutinante e dosagem proteica e determinada sua Atividade hemaglutinante específica (AHE), sendo a melhor atividade específica para o tampão fosfato de sódio (Na2HPO40,01 mol.L-1 pH=7,5) com 20,23235 (mg/mL-1) de AHE.

PALAVRAS CHAVES: Euphorbia hirta L.; Extratos; Lectinas

INTRODUÇÃO: Observa-se o aumento na procura de plantas medicinais devido a vários fatores, como a crise econômica, o alto custo dos medicamentos industrializados e ainda difícil acesso à assistência médica e farmacêutica. É importante discriminar as relações entre a ciência e o empirismo, sendo indispensável uma ampla pesquisa em plantas medicinais, envolvendo várias ciências, como a química e a farmacologia (BOSCOLO & VALLE, 2008). Euphorbia hirta L.é uma planta pertencente à Família Euphorbiaceae, uma das mais extensas famílias de fanerógamos (CRONQUIST, 1981). Segundo a medicina popular a planta é utilizada para o tratamento de asma, bronquite, tosse nervosa, febre do feno, queimaduras e enfisema, sendo conhecida popularmente por Erva-de-Santa-Luzia. A existência de atividade antibacteriana (VIJAYA et al, 1995), analgésica e anti-inflamatória (LANHERS et al,1991) é comprovada para os extratos das folhas de E. hirta L. As lectinas são proteínas que têm diferentes papéis biológicos: antifúngico, antibacteriano, antiviral, antitumoral;conforme a afinidade com um grupo de carboidratos. De maneira abrangente, as lectinas podem assumir papéis exógenos como, atividade antifúngica contra fitopatógenos ou podem assumir papéis endógenos se interagirem com ligantes do próprio organismo para auxiliar a deposição de proteínas de reservas nos corpos proteicos. (SÁ, R.A., 2008). A presença de lectinas em plantas e em demais seres vivos está relacionada à defesa química,destacando-se assim como aminoácidos não proteicos, alcalóides, fenóis, saponinas, RIPs (proteínas inativadoras de ribossomos), quitinases, inibidores de proteases e alérgenos(BOWLES, 1990; XAVIER-FILHO,1993).O presente trabalho visa detectar a atividade lectínica das folhas de E. hirta L.em diversos extratores.

MATERIAL E MÉTODOS: Para preparação dos extratos, 10g de farinha das folhas de E. hirta L. (FFE) foram submetido à extração de proteínas em diferentes soluções tamponadas com variação de pH: solução de NaCl 0,15 mol. L-1 pH=7,4 ,(EB1), tampão fosfato Na2HPO4 0,01 mol.L-1 pH= 6,5 (EB2), pH= 7,0 (EB3), pH= 7,5 (EB4) e o tampão TRIS-HCl 0,01 mol.L-1 pH= 7,5 (EB5), pH= 8,0 (EB6), pH= 8,5 (EB7), pH= 9,0 (EB8). Os diferentes extratos foram submetidos à agitação magnética durante 4 horas e centrifugada a 4.000 rpm, durante15 min. a 4 ºC. A atividade lectínica dos extratos foi realizada em placas de microtitulação. Foram colocados 50µl de NaCl 0,15M em cada poço; em seguida, foram adicionados ao segundo poço 50 µl da amostra a ser avaliada. Após uma diluição serial, 50µl de eritrócitos glutarizados de coelhos foram adicionados em todos os poços e as placas foram incubadas por 45 min. A atividade hemaglutinante (AH) foi definida, correspondendo ao inverso da maior diluição (título -1) na qual ainda observou-se a aglutinação total dos eritrócitos. Esta atividade está relacionada à especificidade e afinidades dos sítios de ligação das lectinas a carboidratos presentes nas paredes dos eritrócitos. Os extratos também foram avaliados quanto à presença de proteínas por espectrofotometria. O método utilizado foi o de Lowry et al (1951). O princípio do método baseia-se numa mistura contendo molibdato, tungstato e ácido fosfórico, (reagente Folin-Ciocalteau), que sofre uma redução quando reage com proteínas, na presença do catalisador cobre (II), e produz um composto com absorção máxima em 750 nm. A concentração proteica foi determinada utilizando albumina sérica bovina (BSA) como padrão.

RESULTADOS E DISCUSSÃO: Os extratos de Euphorbia hirta L apresentaram elevadas concentrações proteicasem todos os tampões (Tabela 1) e aglutinaram eritrócitos glutarizados de coelho. A AH está relacionada à especificidade e afinidades dos sítios de ligação das lectinas a carboidratos presentes nas paredes dos eritrócitos determinadas, principalmente, por pontes de hidrogênio, com a ajuda de forças de van der Walls e interações hidrofóbicas com resíduos de aminoácidos aromáticos(LIS & SHARON, 1986; SHARON & LIS, 2002).. A AH específica (AHE) foi definida pela razão AH/concentração de proteínas (mg/mL). Foi verificado que a melhor solução tampão de extração proteica foi o fosfato de sódio 0,01 mol.L-1, com a faixa de pH=7,5; permitindo maior aglutinação das hemácias (29) e AHE de 20,23235 (mg/mL-1), Tabela 1. Tabela 1-Dosagem proteica, AH e AHE em extratos de E. hirtaL.durante 4 horas. Tampões AH (UH/mL-1) Proteína(mg/mL-1) AHE (mg/mL-1) NaCl pH=7,4 26 18,190 3,51841 Na2HPO4pH=6,5 27 22,523 5,68307 Na2HPO4pH=7,0 27 25,123 5.09493 Na2HPO4pH=7,5 29 25,306 20,23235 TRIS-HClpH=7,5 24 21,456 0,74571 TRIS-HClpH=8,0 26 22,023 2,90605 TRIS-HClpH=8,5 26 21,656 2,95530 TRIS-HClpH=9,0 25 20,506 1,56051 NaCl 0,15 mol.mL-1, Na2HPO4 0,01 mol.L-1, TRIS-HCl 0,01 mol.L-1. Atividade hemaglutinante (AH), unidades de hemaglutinação (UH), AH específica (AHE) determinada através da razão AH/Proteína(mg/mL-1). Observa-se que ambas as soluções-tampões utilizadas na extração de E. hirta L. é eficiente para a extração proteica.

CONCLUSÕES: Euphorbia hirta L.possui em suas folhas atividade lectínica, detectada em todos os extratos e sensível ao tempo de extração. O extrato realizado em tampão fosfato de sódio (Na2HPO4 0,01 mol.L-1 pH=7,5) apresentou uma Melhor Atividade Hemaglutinate específica e será utilizado no processo de purificação da lectina. Determinar sua função biológica e melhor aplicação biotecnológica.

AGRADECIMENTOS: AO LABORATÓRIO DE QUÍMICA DA UFPE-CAMPUS AGRESTE.

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICA: BOSCOLO,O. H.; VALLE, L. S.; Plantas de uso medicinal em Quissamã, Rio de Janeiro, Brasil, IHERINGIA, Sér. Bot., Porto Alegre, v. 63, n. 2, p. 263-277, jul./dez. 2008.

BOWLES, D.J. Defense related proteins in higher plants. Biochemistry, v. 59, p. 837-907, 1990.

CRONQUIST, A.An integrated system of classification of flowering plants. New York: Columbia Universisy Press, 1981.

LANHERS, M. C; FLEURENTIN, J.; DORFMAN, P.; MORTIER, F.; PELT, J. M.; Analgesic, Antipyretic and Anti-Inflammatory Properties of Euphorbia hirta.JornalPlantaMédica, v. 57, issue 03, 1991, pages 225-231.

LIS, H.; SHARON, N. Biological properties of lectins. In: LIENER, I. E.; SHARON, N.; GOLDSTEIN, I. J. (eds). The Lectins: Properties, Functions, and Applications in Biology and Medicine, New York: Academic Press. pp. 265-291, 1986.

RANDAU, K. P.; FLORÊNCIO, D. C.; FERREIRA, C. P.; XAVIER, H. S. Estudo farmacognóstico de Croton rhamnifoliusH.B.K. eCroton rhamnifolioidesPax&Hoffm.(Euphorbiaceae). RevistaBrasileira de Farmacognosia, v.14, n.2, p.89-96,2004.

SHARON, N.; LIS, H. How proteins bind carbohydrates: lessons from legume lectins. Journal of Agricultural and Food Chemistry 50: 6586-6591, 2002.

SÁ,R.A.; Tese de Doutorado, Universidade Federal de Pernambuco, Brasil, 2008.

VIJAYA, K. ; ANANTHAN, S.; NALINI, R.; Antibacterial effect of theaflavin, polyphenon 60 (Camellia sinensis) and Euphorbia hirta on Shigella spp. — a cell culture study. JournalofEthnopharmacology, v. 49, issue2, 1 December 1995, pages 115–118.

XAVIER-FILHO. Sementes e suas defesas contra insetos. Projeto Multinacional de
Biotecnologia e Alimentos. Organizações dos Estados Americanos, p. 1-3, 1993.