ÁREA: Bioquímica e Biotecnologia
TÍTULO: IMUNNOSSENSOR BASEADO EM FILME POLIMÉRICO PARA DETECÇÃO DE TROPONINA T CARDÍACA HUMANA
AUTORES: Batista de Mattos, A. (UFPE) ; Assis Freitas, T. (UFPE) ; Mendonça da Silva, B.V. (UFPE) ; Teixeira Cavalcanti, I. (UFPE) ; Fireman Dutra, R.A. (UFPE)
RESUMO: Um estável filme fino eletroativo do ácido poli (o-aminobenzóico) foi eletropolimerizado sobre a superfície de um eletrodo de carbono vítreo em uma solução de ácido o-aminobenzóico. Em nossos estudos, a troponina T cardíaca humana, um importante biomarcador específico para diagnóstico precoce do infarto agudo do miocárdio, foi selecionado como analito modelo. Os resultados mostraram que os eletrodos mostraram uma boa estabilidade mantendo 91,6% da sua resposta inicial após 18 dias e bom limite de detecção (0,015 ng mL-1) proporcional às diferentes concentrações de TnT. A curva de calibração foi obtida com um coeficiente de correlação de 0,9928 (p <0,0001; n = 5), o que permite uma determinação confiável de TnT níveis de concentração alcance de relevância clínica.
PALAVRAS CHAVES: imunossensor; eletropolimerização; troponina T
INTRODUÇÃO: O uso de filmes poliméricos tem atraído considerável interesse no desenvolvimento de imunossensores amperométricos (WANG et al., 2006; WANG et al., 2006). Estes filmes poliméricos podem aumentar a transdução do sinal, devido à resistência mecânica do filme, condutividade elétrica e maleabilidade para a imobilização de diversas moléculas (ZARE et al. 2005). O ácido poli (o-aminobenzóico), poli (o-ABA), foi utilizado para orientar a imobilização do anticorpo na superfície do eletrodo através dos grupos carboxílicos do filme polimérico. Neste trabalho, a troponina T cardíaca humana (TnT), um importante biomarcador específico para detecção do infarto agudo do miocárdio, foi selecionado como modelo de analito.
MATERIAL E MÉTODOS: Os estudos amperométricos foram realizados utilizando eletrodo de carbono vítreo, platina e eletrodo de Ag/AgCl como eletrodos de trabalho, auxiliar e referência, respectivamente. A Figura 1 demonstra o processo de modificação do eletrodo de carbono vítreo com o filme polimérico de o-ABA. A eletropolimerização foi realizada em 10 mMol L-1 de solução de o-ABA em 0,5 Mol L-1 de H2SO4. Após eletropolimerização, a superfície do eletrodo foi incubada com anticorpo anti-TnT. A detecção da TnT foi realizada utilizando modelo imunológico “sanduíche” com anti-TnT e anti-TnT conjugado a peroxidase (anti-TnT-HRP), como anticorpos primário e secundário, respectivamente. O eletrodo foi imerso em uma solução de substrato contendo H2O2 e hidroquinona em tampão fosfato (10 mMol L-1, pH 7,4) então o produto enzimático foi detectado e avaliado pela técnica eletroquímica de voltametria cíclica.
RESULTADOS E DISCUSSÃO: Os resultados mostraram um par de picos redox bem definido no eletrodo limpo em comparação com o eletrodo modificado com uma diminuição drástica nos picos de corrente. Isto indica à natureza compacta do filme polimérico revestido na superfície do eletrodo. Em relação às imagens de microscopia, a espessura da superfície do eletrodo aumentou de 149,3 nm para 775,3 nm, após a modificação com o filme polimérico. O imunossensor também foi avaliado frente às respostas analíticas. De acordo com os resultados, os eletrodos mostraram uma boa estabilidade mantendo 91,6% da sua resposta inicial após 18 dias e bom limite de detecção (0,015 ng mL-1) proporcional às diferentes concentrações de TnT (Figura 2).
FIGURA 1
Desenho esquemático do processo de modificação do eletrodo de carbono vítreo com o filme polimérico de o-ABA.
FIGURA 2
Curva de calibração do imunossensor.
CONCLUSÕES: O imunossensor proposto baseado em filme polimérico permitiu uma determinação confiável de TnT em níveis de concentração com relevância clínica. Diante dos resultados apresentados, o imunossensor mostrou-se atraente para a construção de um dispositivo amperométrico estável para detecção da TnT, específico biomarcador para diagnóstico do infarto agudo do miocárdio.
AGRADECIMENTOS: CAPES E UFPE.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICA: WANG C.Y.; WANG Z.X.; GUAN J.; HU X.Y. 2006. Voltammetric determination of meloxicam in pharma ceutical formulation and human serum at glassy carbon electrode modified by cysteic acid formed by electrochemical oxidation of l-cysteine. Sensors, 6: 1139-1152.
WANG H.S.; LI T.H.; JIA W.L; XU H.Y. 2006. Highly selective and sensitive determination of dopamine using a Nafion/carbon nanotubes coated poly(3-methylthiophene) modified electrode. Biosensors and Bioelectronics, 22: 664–669.
ZARE H.R.; MEMARZADEH F.; ARDAKANI M.M.; NAMAZIAN M.; GOLABI S.M. 2005. Norepinephrine-modified glassy carbon electrode for the simultaneous determination of ascorbic acid and uric acid. Electrochimica Acta, 50: 3495–3502.
