ÁREA: Produtos Naturais
TÍTULO: Pré purificação de substâncias com atividade antimicrobiana do isolado fúngico CFAM 8
AUTORES: MENDES, G. (UFSJ) ; SILVEIRA, R. S. (UFSJ) ; ALMEIDA, L. M. (UFSJ) ; FERREIRA, J. M. S. (UFSJ) ; MAGALHÃES, J. T. (UFSJ) ; CARNEIRO, A. L B. (UFAM) ; FERNANDES, O. C. C. (FIOCRUZ-AM) ; CHAGAS, R. C. R. (UFSJ) ; DA SILVA, S. L. (UFSJ) ; DA SILVA, J. C. (FIOCRUZ-AM)
RESUMO: Considerando o aumento da resistência microbiana aos antibióticos atuais, têm-se
buscado o isolamento de novos antibacterianos. O objetivo deste estudo foi o isolamento
de substâncias com potencial antimicrobiano de fungos amazônicos. O CFAM 8 foi crescido
em Extrato de Malte e os extratos foram filtrados, submetidos à extração e após serem
rotaevaporados e liofilizados foram testados contra: Samonella enterica, Klebsiella
pneumoniae, Staphylococcus aureus e Bacillus subtilis. A fração de acetato de etila foi
submetida à cromatografia em coluna. Das 11 frações obtidas 2 apresentaram atividade e
foram submetidas ao HPLC.Este estudo mostrou o potencial dos fungos como produtores de
substâncias antimicrobianas as quais estão em processo de isolamento e caracterização.
PALAVRAS CHAVES: antimicrobianos, fungos amazônicos
INTRODUÇÃO: Antibióticos são compostos naturais ou sintéticos capazes de inibir o crescimento ou
causar a morte de fungos ou bactérias (Guimarães et al., 2010). As substâncias com atividade antimicrobiana produzidas por fungos que foram isoladas e transformadas em fármacos estão trazendo avanços significativos tanto na saúde humana, como animal. Considerando o enorme potencial dos fungos nos processos bioquímicos ou biotecnológicos, e também o aumento da resistência microbiana aos antibióticos atuais, têm-se buscado o isolamento ou a produção de novas moléculas ou novas classes de substâncias antibacterianas. O isolamento destes compostos a partir de fungos tem uma grande importância histórica e atualmente estes organismos têm sido considerados verdadeiras “usinas” de substâncias bioativas. O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade dos extratos do isolado, CFAM 8, contra as bactérias Samonella enterica sbsp. enterica serovar choleraesuis, Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus aureus e Bacillus subtilis.
MATERIAL E MÉTODOS: Oito fungos foram testados, sendo o isolado CFAM 8 escolhido por apresentar maior
atividade antimicrobiana. Os fungos foram crescidos em Extrato de Malte a partir da
inoculação de 1x107 esporos. A cultura permaneceu sob agitação de 140 rpm a 28°C por
7 dias. Os extratos foram filtrados e submetidos à extração líquido-líquido com
hexano, diclorometano e acetato de etila. Posteriormente, foram rotaevaporados e
liofilizados para o teste antimicrobiano contra as bactérias: Samonella enterica
sbsp. enterica serovar choleraesuis, Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus aureus e
Bacillus subtilis. No teste de atividade antimicrobiana utilizou-se além do método
de difusão em disco o ensaio qualitativo da microgota, no qual 10μL dos extratos
dissolvidos em DMSO (2mg/mL) foram aplicados no Ágar Müller Hinton previamente
inoculado com as bactérias. O antibiótico usado como controle foi estreptomicina
(1mg/mL) e o DMSO como controle negativo. As placas foram incubadas a 37ºC por 24
horas para a avaliação da inibição. O perfil cromatográfico das frações resultantes
da extração líquido-líquido foi obtido a partir da cromatografia em camada delgada
(CCD). Uma destas frações que apresentou atividade foi submetida à cromatografia em
coluna usando como fase estacionária sílica gel e como fase móvel os eluentes acetato
de etila e metanol em gradiente crescente de polaridade. As frações obtidas que
apresentaram atividade foram submetidas à cromatografia líquida de alta eficiência
usando como fase estacionária uma coluna de fase reversa, C18, e como fase móvel um
gradiente entre metanol e água. Os sinais UV foram registrados a 230 e 280 nm.
RESULTADOS E DISCUSSÃO: Para o teste antimicrobiano o ensaio qualitativo da microgota mostrou-se o melhor para
a visualização da atividade antimicrobiana. A fração acetato de etila apresentou maior
atividade dentre as obtidas da extração líquido-líquido. Da cromatografia em coluna
foram obtidas onze frações, das quais apenas duas apresentaram atividade. A K.
pneumoniae foi a bactéria mais inibida frente ao extrato bruto. Após o fracionamento,
todas as quatro bactérias testadas foram inibidas. Os cromatogramas obtidos mostraram
que a amostra precisa ser submetida mais vezes aos métodos cromatográficos utilizados.
CONCLUSÕES: Este estudo mostrou o potencial do CFAM 8 como produtor de substâncias
antimicrobianas já que foi capaz de inibir o crescimento das quatro bactérias
testadas. As frações que apresentaram atividade precisam ser submetidas mais vezes
aos métodos cromatográficos para a obtenção de substâncias ativas isoladas.
AGRADECIMENTOS: FAPEMIG, UFSJ
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICA: Guimarães et al. (2010). Química Nova. V. 33 n.3: 667-679
