ÁREA: Bioquímica e Biotecnologia
TÍTULO: ISOLAMENTO DE PEPTÍDEOS BIOATIVOS A PARTIR DA SECREÇÃO CUTÂNEA DE Hypsiboas raniceps (ANURA: HYLIDAE)
AUTORES: RIBEIRO, A.M.V. (UFPI) ; MIURA, L.M.C.V. (UFPI) ; LEITE, J.R.S.A. (UFPI)
RESUMO: Os peptídeos antimicrobianos isolados a partir da secreção cutânea de anfíbios são eficientes no combate a uma grande variedade de micro-organismos patogênicos ao homem, portanto objetivou-se a purificação, caracterização e determinação de atividade biológica de peptídeos isolados a partir da secreção de Hypsiboas raniceps. A coleta dos anfíbios foi feita no Delta do Parnaíba, especificamente na Ilha Grande de Santa Isabel. A extração do veneno foi feita por estimulação elétrica na região glandular do animal. O extrato total foi filtrado, liofilizado, acondicionado´à - 20ºC e purificado usando cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) em coluna semi-preparativa C18.Foram obtidas 24 frações com graus de pureza distintos. Os dados sugerem que o veneno é rico em peptídeos bioativos.
PALAVRAS CHAVES: cromatografia, anfíbios, biotecnologia.
INTRODUÇÃO: Atualmente já foram descritos um grande número de peptídeos antimicrobianos, os quais são produzidos e secretados em uma ampla gama de organismos. Nas secreções cutâneas dos anfíbios foi identificada uma fonte abundante de moléculas bioativas. Os peptídeos antimicrobianos isolados a partir da secreção cutânea de anfíbios têm sido considerados, potencialmente, como uma ferramenta para o desenvolvimento de futuras drogas, por serem eficientes no combate a uma grande variedade de micro-organismos patogênicos ao homem, funcionando como um mecanismo de defesa inato (CONLON et al., 2004). Hypsiboas raniceps pertence ao grupo H. albopunctata, sendo a espécie do grupo com maior distribuição geográfica, ocorrendo desde o norte da região Neotropical, na Hiléia e nas savanas da Guiana, passando pelo cerrado, caatinga, floresta atlântica e pinheirais de araucária, e chegando ao chaco argentino e chaco paraguaio (FROST, 1985). Encontradas principalmente em florestas secas topicais, subtropicais ou tropicais de baixa altitude, rios, pântanos, lagos de água doce, marismas de água doce, áreas urbanas e florestas secundárias altamente degradadas. Fatores abióticos influenciam a atividade de canto dessa espécie. O presente trabalho tem como objetivo a purificação, caracterização e determinação de atividade biológica de peptídeos bioativos isolados a partir da secreção do hilídeo Hypsiboas raniceps coletada na região do APA do Delta.
MATERIAL E MÉTODOS: A coleta do material biológico foi realizada na região do Delta do Parnaíba, especificamente na Ilha Grande de Santa Isabel, município de Ilha Grande, Piauí com licença IBAMA. A extração da secreção cutanêa foi realizada por meio de estimulação elétrica da região glandular do animal.A pele foi lavada com água Milli Q e a solução foi recolhida em um recipiente seco.O extrato total foi filtrado em um filtro de 0,45 mm e posterioriormente filtrado em um filtro de 0,22 mm e liofilizado em sistema de concentrador de amostras(CENTRIVAP)e depois acondicionado a -20ºC. O material foi purificado em sistema de cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC)da Shimadzu modelo 20A com detector UV. A fase estacionária utilizada foi uma coluna de fase reversa (coluna C18 semi-preparativa) e como fase móvel utilizou-se água/acetonitrila com proporção 70:30. As frações foram monitoradas nos comprimentos de onda de 216 nm e 280 nm, geralmente adotados na literatura para detecção de peptídeos.
RESULTADOS E DISCUSSÃO: Os dados preliminares sugerem que a secreção cutânea de H. raniceps é rica em peptídeos bioativos comparados a outras espécies de anuros, baseando-se na quantidade e altura dos picos formados no gráfico obtidos na cromatografia liquida. A partir da purificação por meio de sistema de HPLC foram obtidas 24 frações com graus de pureza distintos. Em seguida serão realizadas caracterizações por espectrometria de massa e posterior determinação da sequência de aminoácidos para estudar a relação estrutura/função, assim como a realização de testes biológicos de atividade antibacteriana.
CONCLUSÕES: A secreção cutânea de H. raniceps possivelmente é rica em peptídeos bioativos comparados a outras espécies de anuros devido a grande quantidade de picos com grau de pureza distintos.Provavelmente esses peptídeos isolados terão uma grande atividade antimicrobiana possibilitando a produção de novos fármacos.
AGRADECIMENTOS: UFPI e Cnpq.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICA: CONLON, J.M., KOLODZIEJEK, J., NOWOTNY, N., 2004. Antimicrobial peptides from
ranid frogs: taxonomic and phylogenetic markers and a potential source of
new therapeutic agents. Biochim. Biophys. Acta 1696, 1–14.
FROST, D. R. 1985. Amphibian species of the world. A taxonomic and geographical reference. Lawrence, Allen 732p.
