ÁREA: Bioquímica e Biotecnologia
TÍTULO: AVALIAÇÃO DO POTENCIAL LIPOLÍTICO DE UMA ESPÉCIE DE PENICILLIUM sp PARA APLICAÇÃO NA PRODUÇÃO DE BIODIESEL
AUTORES: CARVALHO, R.S. (UFSJ) ; CARVALHO, F.S (UFSJ) ; FERREIRA, J.M.S (UFSJ) ; CARNEIRO, A. L. B (UFAM) ; SILVA, S.L (UFSJ) ; PARREIRA, A.G (UFSJ) ; FERNANDES,O ,C.C. (FIOCRUZ MAN) ; SILVA, J.C (FIOCRUZ MAN) ; ALMEIDA,F.G.O (UFSJ)
RESUMO: O fungo do gênero Penicillium sp (CFAM 116), originados do solo amazônicos, apresenta
um potencial lipolítico e este foi testado a sua atividade lipolítica a partir da
hidrólise dos triacilgliceróis contidos nos óleos de soja, oliva, milho e girassol,
através de titulação potenciométrica convencional das diferentes fontes de carbono. O
óleo de soja apresentou-se como melhor fonte de carbono para a produção de lípase pelo
Penicillium sp (CFAM 116).
PALAVRAS CHAVES: lípases, óleos ,fungo penicillium sp
INTRODUÇÃO: Os fungos do gênero Penicillium sp são considerados ótimos produtores de lipases, que
são enzimas que atuam sobre lipídeos, catalisando reações químicas. Estas enzimas são
classificadas como hidrolases e atuam na quebra de triacilgliceróis formando ácidos
graxos e glicerol em meio aquoso ou na reação inversa em meio orgânico. Devido as
diversas reações catalisadas por lipases, essas enzimas possuem importante aplicação
nas indústrias bioquímicas, alimentícias, na produção de biodiesel, dentre outros
(COLEN, G et al.,2006). Diversos métodos têm sido descritos na literatura para a
detecção da atividade lipolítica em preparações brutas ou purificadas (HASAN, 2009).
Alguns métodos utilizam meios sólidos para observar diretamente a reação de lipólise
através de mudanças na aparecência do substrato (tributirina e trioleína, por
exemplo). O aparecimento de halos claros ao redor da colônia crescida em agar-
tributirina indica a produção de lipase. Métodos titulométricos são muito usados, no
qual reação de lipólise geram ácidos quel podem ser medidos titulometricamente. O
pH-stat é o método mais usado geralmente como referência no ensaio lipolítico
(Brockman 1981, Dellamora-Ortiz et al., 1997). Apesar de não ser uma técnica muito
barata, entretanto é uma técnica conveniente para caracterização da especificidade e
atividade de lipase. O pH-stat é um equipamento comercialmente vendido pela
Radiometer (Copenhagen,Denmark) or Metrohm Ltd. (Herisau, Switzerland). É um método
quantitativo sensível a 1µmol de acido graxo liberado por minuto. O objetivo desse
trabalho foi avaliar quantitativamente a produção de lipase através de uma
metodologia proposta, barata e rápida, utilizando titulação potenciométrica
convencional.
MATERIAL E MÉTODOS: Para a indução da produção de lipase, um milhão de esporos do fungo Penicillium sp
(CFAM116), isolado de solo amazônico e cedidos pela FIOCRUZ (Manaus-AM), foram
inoculados em erlenmeyers contendo o meio 70mL de meio czapeck sem dextrose e
complementados com quatro óleos: soja, oliva, milho e girassol,que foram testados
separadamente. Os frascos foram incubados em agitadores orbitais tipo shakers
(Solabcientífica) sob agitação constante de 140 rpm a 28oC durante sete dias. A
avaliação da atividade lipolítica foi feita através da titulação potenciométrica
diretamente do produto de lipólise, isto é, a partir dos ácidos graxos produzidos
pela hidrólise dos triacilgliceróis contidos nos sobrenadanates dos diferentes óleos
avaliados. A metodologia foi adaptada a partir de WATANABE et al (1977). A titulação
foi feita com solução de KOH 0,3M e realizadas em intervalos de 24 horas a partir do
inóculo. Foi feito um branco, na qual não foi inoculado fungo e as medidas
titulométricas foram realizadas em triplicata para cada dia. Após o sexto dia, foram
calculados o número de mols de ácido graxo, bem como o desvio padrão para cada dia.
RESULTADOS E DISCUSSÃO: Observou-se um aumento crescente na produção de ácido graxo com o passar dos dias, na
qual a melhor fonte de carbono para o Penicillium sp (CFAM 116) foi o óleo de soja,
produzindo cerca de 3,5 mols de ácido graxo no tempo de 120 horas. O óleo de oliva foi
a segunda melhor fonte de carbono apresentando 2,5 mols de ácido graxo no tempo 145
horas, seguido do óleo de milho e girassol que apresentaram resultados semelhantes,
porém com pouca produção de ácidos graxos. A condição de estresse para a produção
lipolítica mostrou-se eficiente para a quantificação do produto de lipólise e, assim,
determinar a atividade enzimática.
CONCLUSÕES: Foi possível aplicar a metodologia de maneira eficaz para estimar a atividade
lipolítica do Penicillium sp(CFAM116),esse fungo mostrou-se como um potencial produtor
de lipases e o óleo de soja mostrou-se como a melhor fonte de carbono para a indução ao
extresse lipolítico em relação aos outros óleos utilizados,sendo ele o melhor produtor
de ácidos graxos em um menor período de tempo.Etapas seguintes estão sendo
desenvolvidas na qual será realizada a caracterização molecular e morfológica da cepa
em estudo e isolamento da lipase expressa como uma alternativa para o uso na produção
de biodiesel.
AGRADECIMENTOS:
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICA:
•BROCKMAN,HL. Triglyceride lipase fromporcine pancreas.Methods Enzymol 1981;71:619–27.
•COLEN, G. Isolamento e seleção de fungos filamentos produtores de lipases. Tese de doutorado, UFMG. Faculdade de Farmácia. Belo Horizonte, 2006.
•DELLAMORA-ORTIZ GM, MARTINS RC, ROCHA WL, DIAS AP. Activity and stability of a Rhizomucor miehei lipase in hydrophobic media. Biotechnol Appl Biochem 1997;26:111–6.
•HASAN, F, SHAH ,AA, ABUL-HAMEED , A. Influence of culture conditions on lipase production by Bacillus sp.FH5. Ann Microbiol 2006;56(3):247–52.
•WATANABE, N.,OTA,Y.,MINODA,Y e YAMADA,k.1977.Isolation and identification of alkaline lipase producing microrganisms,cultural conditions and some properties of crude enzymes.Agricultural and Biological Chemistry 41,1353-1358.
