ÁREA: Produtos Naturais
TÍTULO: ATIVIDADE INIBITÓRIA SOBRE A ALFA-GLUCOSIDASE DE SAPONINAS ISOLADAS DA PLANTA AMPELOZIZYPHUS AMAZONICUS
AUTORES: CASTRO, L.C. (UFAM) ; LIMA, E.S. (UFAM) ; AMARAL, A.C.F. (FIOCRUZ) ; SILVA, J.R.A. (UFAM)
RESUMO: Ampelozizyphus Amazonicus é uma espécie vegetal utilizada na medicina popular da região amazônica como agente profilático da malária. A avaliação da atividade profilática ou preventiva contra esporozoítas e formas exoeritrocítricas de Plasmodium, revelaram a redução do parasitismo nas galinhas inoculadas com extratos etanólicos brutos. Inspirados pelos resultados relevantes descritos para a espécie botânica, os esforços estão direcionados na busca da substância ativa ou o pool de substâncias ativas responsável pela atividade profilática observada. O presente trabalho descreve a avaliação de saponinas isoladas da espécie A. amazonicus por meio de testes in vitro de inibição da enzima α-Glucosidase, uma enzima que atua sobre o sistema digestivo.
PALAVRAS CHAVES: ampelozizyphus amazonicus, saponinas, glucosidase
INTRODUÇÃO: A. amazonicus é uma planta conhecida popularmente como cerveja de índio ou saracura-mirá, sendo utilizada em algumas regiões da Amazônia como agente preventivo da malária, antídoto do veneno de cobra e antiinflamatório. Segundo a população, a raiz é raspada, fresca ou armazenada e solubilizada em água na proporção de uma colher de sopa rasa para um copo de água. Após a solubilização de componentes da raiz, o conteúdo adquire uma coloração amarelada e espumosa, devido ao alto teor de saponinas presentes na planta. Dessa maneira, o preparado é bebido diariamente, antes do banho, e possui um sabor amargo inicial que posteriormente passa para adocicado. Segundo relatos, a planta assim utilizada demonstrou ação profilática contra malária.
Recentemente, diversas ações farmacológicas foram descritas para A. amazonicus, por exemplo, antimicrobiana, antiviral, antimalárica e hepatoprotetora (AMARAL et al., 2008). O estudo fitoquímico de A. amazonicus levou a identificação de triterpenos da classe lupano, chalconas e algumas saponinas (KRETTLI et al., 2001).
A importância dessa espécie vegetal na medicina popular e farmacologia, motivou os nossos estudos para a identificação das substâncias responsáveis pelas atividades descritas. Nesse contexto, o presente trabalho apresenta os resultados da avaliação de saponinas isoladas do extrato metanólico obtidos da raiz de A. amazonicus no ensaio de inibição da enzima -glucosidase. Substâncias inibidoras das glucosidases são agentes promissores do ponto de vista farmacológico, estando relacionadas a atividades antidiabética, antiviral e antitumoral (MELO e CARVALHO, 2006).
MATERIAL E MÉTODOS: O extrato metanólico (EM) de A. amazonicus, obtido a partir da maceração das cascas secas e moídas, foi solubilizado em etanol e submetido à precipitação seletiva de saponinas por método geral. O precipitado obtido (SAPMeOH) foi fracionado por cromatografia em coluna, fornecendo oito frações (D1 a D8).
As análises por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) foram realizadas em um cromatógrafo líquido LC - 10AT Shimadzu com coluna de fase reversa Shimpack ODS (250 mm x 4,6 mm x 5 mm), fase móvel acetonitrila / água com 0,05 % de ácido trifluoracético (0:100 até 70:30, em 45 min), detector de arranjo de diodo SPD- M10A (varredura na região de 200-500 nm), fluxo de 1mL / min.
A avaliação de atividade de inibição da enzima -glucosidase (Sigma-Aldrich) foi realizada conforme método descrito na literatura com modificações (WANSI et al., 2006). O sistema, contendo as substâncias (1 mg/mL) e a enzima, foi incubado a 37ºC por 2 minutos, pH 6,9. A inibição foi medida por leitor de Elisa e os resultados foram expressos como porcentagem de inibição. O padrão utilizado foi a Arcabose.
RESULTADOS E DISCUSSÃO: As amostras que apresentaram inibição significativa da enzima -glucosidase foram: D2: 85,6%, D3: 87,2%, D5: 86,4%, D6: 93,9%, D7: 83,1% e SAPMeOH: 97,0 (Figura 01).
A avaliação por CLAE de SAPMeO permitiu a caracterização de saponinas com tempo de retenção entre 0-10 minutos e flavonóides na faixa de 20 a 30 minutos. O perfil cromatográfico da fração que apresentou maior atividade (D6, 93,9%), apresentou saponinas da classe damarano como constituintes majoritários.
Atividades antidiabética ou de inibição de glucosidases não são atípicas para triterpenos ou mesmo para saponinas (Luo et al., 2006). Nesse contexto, os resultados obtidos sugerem que a inibição da enzima alfa-glucosidase pode ser atribuída as saponinas. Esses resultados incentivam a continuidade dos estudos, principalmente por meio de ensaios in vivo de avaliação de inibição enzimática e toxicológica.
CONCLUSÕES: As frações isoladas de A. amazonicus contendo alta concentração de saponinas apresentaram atividade de inibição da enzima glucosidase superior a observada para a Acarbose. A continuidade dos estudos com essa espécie botânica permitirá avaliar as respostas em sistemas in vivo.
AGRADECIMENTOS: Agradeço, primeiramente a Deus, aos meus pais Rose e Valdean e ao meu orientador Jefferson Rocha.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICA: AMARAL, A.C.F.; FERREIRA, J.L.P.; MOURA, D.F.; CARVALHO, J.R.; OHANA, D.T.; ECHEVARRIA, A.; ROSÁRIO, V.E.; LOPES, D.; SILVA, J.R.A. 2008.Updated studies on Ampelozizyphus amazonicus, a medicinal plant used in the Amazonian Region. Pharmacognosy Reviews. 2: 308-316.
KRETTLI, A.U.; ANDRADE-NETO, V.F.; BRANDÃO, M.G.L.; FERRARI, W.M.S. 2001. The seach for new antimalarial drugs from plants used to treat fever and malaria or plants randomly selected: a review. Mem Inst Oswaldo Cruz 96: 1033-1042.
LUO, JIAN-GUANG.; MA, L.; KONG, LING-YI. 2008. New triterpenoid saponins with strong a-glucosidase inhibitory activity from the roots of Gypsophila oldhamiana. Bioorganic & Medicinal Chemistry 16: 2912–2920.
MELO, E.B.; CARVALHO, I. 2006. α e β-glucosidases como alvos moleculares para desenvolvimento de fármacos. Quim. Nova, 29: 840-843.
WANSI, J.D.; WANDJI, J.; MEVA’A, L.M.; WAFFO, A.F.K.; RANJIT, R.; KHAN, S.N.; ASMA, A.; IQBAL, C.M.; LALLEMAND, Marie-Christine.; TILLEQUIN, F.; TANEE, Z.F. 2006. a-Glucosidase Inhibitory and Antioxidant Acridone Alkaloids from theStem Bark of Oriciopsis glaberrima ENGL. (Rutaceae). Chem. Pharm. Bull. 54: 292—296.
