ÁREA: Química Analítica
TÍTULO: DETERMINAÇÃO DE AVERMECTINAS EM LEITE BOVINO
AUTORES: RUBENSAM, G. (LANAGRO-RS) ; BARRETO, F. (LANAGRO-RS) ; HOFF, R. B. (LANAGRO-RS)
RESUMO: RESUMO: As avermectinas são lactonas macrocíclicas com propriedades antiparasitárias que podem ser encontradas como resíduos no leite. Métodos multiresíduos de triagem e de confirmação, por CLAE-FL e CLAE-EM/EM foram utilizados neste trabalho para a determinação destas substâncias em extratos adicionados de leite bovino obtidos por ELL com partição em baixa temperatura. Foram obtidos LD’s na faixa de 0,1-5,0 mg L-1 com separações e níveis de interferentes ainda não observados na literatura.
PALAVRAS CHAVES: palavras-chave: avermectinas, multiresiduos, leite.
INTRODUÇÃO: As avermectinas pertencem ao grupo das lactonas macrocíclicas que têm propriedades antiparasitárias em baixas doses (DURDEN, 2007). O monitoramento destes resíduos em matrizes de origem bovina é realizado pelo Ministério da Agricultura através do Plano Nacional de Controle de Resíduos e Contaminantes (PNCRC). Os limites máximos de resíduos (LMR) seguem as recomendações do CODEX ALIMENTARIUS (WHO, 2002). No leite, a ivermectina (IVR) e a abamectina (ABA), a doramectina (DOR), a eprinomectina (EPR) têm como LMR 10, 15 e 20 mg L-1, respectivamente. Para substâncias de uso não permitido, como a emamectina (EMA) e a moxidectina (MOX), o limite de referência é igual ou menor ao respectivo Limite Mínimo de Desempenho Necessário (LMDR) (DOU no. 100, 2009). A determinação destas substâncias em leite e realizada por cromatografia líquida com detecção por fluorescência (CLAE-FL), para métodos de triagem, e a cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas (CLAE-EM/EM), para métodos confirmatórios. Por CLAE-FL, as avermetinas são derivatizadas por desidratação do anel furânico, gerando derivados fluorescentes, com limites de detecção (LD) de 0,1 mg L-1 (BERENDSEN et. al., 2007). Por CLAE-EM/EM obtem-se sensibilidade de 0,5-20,0 mg L-1 (TURNISPEED, et al., 2005). Para obter extratos de menor complexidade, Goulart et. al. (2008) realizaram extração líquido-líquido com clean-up em baixa temperatura (ELL-bt) para extrair piretróides de amostras de leite, de forma a reduzir a quantidade de gorduras interferentes. Com o objetivo de contribuir com o aumento da variedade das análises que compõe o PNCRC, este trabalho apresenta métodos analíticos de triagem e confirmatório para a determinação das avermectinas, utilizando extração ELL-bt em amostras adicionadas de leite bovino.
MATERIAL E MÉTODOS: No método de triagem as analises foram realizadas em cromatógrafo Shimadzu SIL-HTc com detector de fluorescência (EX. 365 nm, Em. 470 nm) equipado com coluna Agilent Zorbax SB, C18 (3,5 mm, 150 x 4,6mm). A fase móvel foi MeOH:ACN:H2O (45:45:5) com fluxo de 0,6 mL min-1. No método confirmatório, foi utilizado cromatógrafo Agilent série 1100 acoplado a espectrômetro de massas em tandem (Applied Biosystems API 5000) equipado com coluna Phenomenex Luna (5 mm,150 x 2 mm). Utilizou-se como fase móvel tampão acetato 50 mM pH 4, água e acetonitrila (2,5:2,5:95, v/v). O modo de ionização foi por electrospray no modo positivo (ESI+), A extração das avermectinas foi realizada de acordo com o procedimento citado no trabalho de Goulart et al.(2008). O extrato foi posteriormente injetado no CLAE-EM/EM ou foi derivatizado conforme descrito na literatura (BERENDSEN, et al., 2007) e em seguida injetado no sistema CLAE-FL.
RESULTADOS E DISCUSSÃO: O método de triagem apresentou uma boa separação dos analitos (fig.1), com um LD numa faixa de 1,5-12 mg L-1, porém com baixa reprodutibilidade da reação de derivação dos extratos, com CV% em torno de 45% (n=5). Por CLAE-EM/EM foi possível obter um LD numa faixa de 0,1-5,0 mg L-1 e uma linha de base sem picos interferentes, revelando melhores resultados e separação mais eficiente do que os encontrados na literatura. Apesar da ELL ter sido eficiente no processo do clean-up (fig. 2), a recuperação dos analitos ficou inferior a 76% e o CV% variou entre 10-24% (n=5). Os efeitos observados nos dois métodos podem ser explicados pela presença de água no extrato que interferiu no volume final e variou o rendimento da reação de derivatização.
CONCLUSÕES: Os procedimentos que vêm sendo executados para a construção de métodos analíticos validados para a determinação das avermectinas têm sido adequados para a proposta de trabalho, segundo a interpretação dos seus resultados. Porém, devido aos problemas relativos à presença da água nos extratos, os métodos apresentados ainda estão sendo ajustados a fim de entrar no sistema de rotina do PNCRC. Alternativas de retirada de água dos extratos foram encontradas na literatura e estão sendo avaliadas para melhorar os dados já existentes.
AGRADECIMENTOS: MAPA, pela elaboração do projeto. CNPq, pelo financiamento.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICA: BERENDSEN, B. J. A., MULDER, P. P. J., van RHIJN, H. A. 2007. The derivatisation of avermectins and milbemycins in milk: New insights and improvement of the procedure. Analytica Chimica Acta, 585, 126–133.
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GOULART, S. M., QUEIROZ, M. R. L.R, NEVES, A. A., QUEIROZ, J. H. 2008. Low-temperature clean-up method for the determination of pyrethroids in milk using gas chromatography with electron capture detection. Talanta, 75,1320–1323.
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