ÁREA: Alimentos
TÍTULO: ANÁLISE DOS COMPOSTOS (POLI)FENÓLICOS DAS FARINHAS DE VARIEDADES CRIOULAS E LOCAIS DE MILHO DESENVOLVIDAS E CULTIVADAS NO EXTREMO OESTE DE SANTA CATARINA
AUTORES: KUHNEN, S. (UFMT) ; CAMPESTRINI, L.H. (UFSC) ; KIST, V. (UFSC) ; DIAS, P. F. (UFSC) ; OGLIARI, J. B. (UFSC) ; MARASCHIN, M. (UFSC)
RESUMO: No presente estudo determinou-se o perfil (poli)fenólico das farinhas de 26 variedades locais de milho cultivadas por pequenos agricultores. Os metabólitos secundários foram extraídos com butanol-HCl (70:30) e analisados por CLAE (C18 Shim-Pack, 25 cm x 4,6 mm, detector UV-visível- 280 nm). Os ácidos (poli)fenólicos encontrados foram protocatecuico, gálico e t-cinâmico, bem como pequenas quantidades de clorogênico, caféico e ferúlico. O conteúdo dos ácidos (poli)fenólicos diferiu significativamente (P<0,01) entre as amostras e a análise dos componentes principais foi usada como ferramenta na discriminação de amostras com maior valor nutricional. Os resultados reforçam o milho como alimento funcional, sugerindo algumas variedades como fontes potenciais à extração desses compostos.
PALAVRAS CHAVES: milho, alimento funcional, compostos (poli)fenólicos
INTRODUÇÃO: A ingestão de alimentos que possam trazer algum benefício à saúde é tema de preocupação crescente, sendo esses denominados de alimentos funcionais. Dentre os mais estudados, podemos destacar os grãos de milho porque, a despeito de sua constituição majoritária em amido e proteínas, o mesmo pode conter diversas substâncias benéficas a saúde, provenientes do metabolismo secundário, tais como compostos (poli)fenólicos. Esses são compostos com reconhecidas atividades antioxidante, anti-inflamatória e anti-carcinogênica (OWEN et al., 2000; KRIS-ETHERTON et al., 2002; ADOM & LIU, 2002). O consumo desse alimento é um hábito bastante antigo na América Latina, principalmente na elaboração de alimentos locais, como tortilhas (México), arepas (Venezuela e Colômbia), cuscuz (Brasil) e polenta (América do Sul) (SERNA-SALDIVAR et al., 2001). No sul do Brasil, alguns municípios (Anchieta, Guaraciaba e Novo Horizonte, por exemplo) têm no milho uma cultura de grande importância econômica e sócio-cultural. Nessa região, foram identificadas cerca de 30 variedades crioulas e locais de milho (VCLM) com características diferenciadas, como variações na coloração dos grãos (brancos, amarelos, vermelhos e roxos) (OGLIARI & ALVES, 2006). Tal diversidade genética pode estar correlacionada a grande diversidade química presente nos tecidos daquele cereal, um aspecto de reconhecida importância em estudos da análise do potencial de biomassas como fonte de compostos de interesse à saúde humana. Neste contexto, o objetivo desse estudo foi comparar o perfil (poli)fenólico das farinhas de 26 VCLM cultivadas no município de Anchieta (Estado de Santa Catarina), obtido através da cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) aliada à análise dos componentes principais (estatística multivariada).
MATERIAL E MÉTODOS: Amostras- Grãos (50 g, peso seco) obtidos pelo Sindicato dos Trabalhadores na Agricultura Familiar junto aos pequenos agricultores (Anchieta, SC), foram trituradas em moinho de laboratório (Cyclone Sample Mill, peneira 0,1 mm).
Obtenção do extrato- As farinhas (1 g, peso seco) foram incubadas com butanol-HCl (70:30, v/v- 20 mL, temperatura ambiente, 1 hora), e em seguida centrifugadas (2.500 rpm, 15 min). Uma alíquota do sobrenadante (2 mL) foi evaporada usando N2 gasoso e ressuspensa em 1,5 mL H2O: EtOH (70:30, v/v).
Identificação de compostos (poli)fenólicos por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE)- 10 uL do extrato foi analisado em cromatógrafo líquido (Shimzadu LC-10A), equipado com coluna C18 (Shim-Pack CLC-ODS, 25cm x 4,6mm) e detector espectrofotométrico UV-visível (280nm). A eluição consistiu de H2O:AcOH:n-BuOH (350:1:10, v/v/v), com fluxo de 0,8 mL/min. Os compostos de interesse foram identificados com base nos tempos de retenção de padrões [ácido protocatecuico (Sigma P-5630), ácido gálico (Sigma G-7384), ácido t-cinâmico (Fluka 96340), ácido siríngico (Fluka 86230), ácido caféico (Sigma C-0625) – 100 ug/mL). A quantificação foi feita utilizando-se uma curva padrão externa de ácido gálico (100 ug/mL – 2,5 ug/mL; r2 = 0,91; y= 1589,9x) e ácido caféico (100 ug/mL - 1ug/mL; r2 = 0,99; y= 532,83x), tomando como base a intensidade dos sinais. Os valores apresentados correspondem à média de 3 injeções/amostra, a partir de análises realizadas em triplicata.
Análise Estatística- Os conteúdos médios de (poli)fenóis foram inicialmente comparados através da análise de variância (ANOVA), com o auxílio do software SAS® 9.1. Subsequentemente, os resultados foram submetidos à análise de componentes principais (PCA), com o auxílio do programa Fitopac® 1.6.
RESULTADOS E DISCUSSÃO: Os resultados usando CLAE revelaram a existência de 3 picos majoritários em todas as amostras, os ácidos protocatecuico (Rt = 4,53 min), gálico (Rt = 5,95 min) e t-cinâmico (Rt = 18,82 min). Foram detectados ainda quantidades menores dos ácidos clorogênico (Rt = 11,79 min), caféico (Rt = 16,50 min) e ferúlico (Rt = 32,01 min). Os resultados quantitativos obtidos por CLAE estão apresentados na Figura 1. Os ácidos gálico (113,89 ug/g - 265,14 ug/g) e protocatecuico (97,27 ug/g - 224,62 ug/g), importantes constituintes do chá verde, foram, juntamente com o ácido t- cinâmico (103,48 ug/g - 299,29 ug/g), os compostos mais abundantes na maioria das amostras. Foram também observadas diferenças com relação ao conteúdo dos (poli)fenóis minoritários. Diferenças significativas (ANOVA, P<0,01) entre as médias dos 26 tratamentos foram observadas para as seis variáveis analisadas (ácido protocatecuico, ácido gálico, ácido clorogênico, ácido caféico, ácido t-cinâmico e ácido ferúlico). Contudo, adotou-se a estratégia de comparação dos resultados quantitativos através de PCA, visando o agrupamento das variedades em função dos metabólitos secundários. A dispersão das variedades segundo os eixos PC1 e PC2 está mostrada na Figura 2. O eixo PC1 apresenta a amplitude de valores para a variável ácido protocatecuico (61,0% da variação total dos dados). O eixo PC2, que corresponde ao ácido t-cinâmico, explicou em 25,97% a variância dos resultados. As amostras com os maiores conteúdos de ácido protocatecuico agruparam-se em PC1 ( + ) e com os maiores conteúdos de ácido t-cinâmico em PC2 (+). Por outro lado, as variedades com menor conteúdo dos referidos compostos localizaram-se em PC 1 e PC2 ( - ).
CONCLUSÕES: Os resultados revelaram que algumas VCLM apresentam quantidades apreciáveis de compostos polifenólicos, os quais possuem propriedades biológicas importantes, tais como anti-carcinogênica e antioxidante. Além disso, a estatística multivariada (PCA) mostrou-se uma ferramenta rápida e útil para a discriminação de amostras com maior valor nutricional. A determinação desses perfis metabólicos poderá ser utilizada futuramente para agregar valor às matérias-primas oriundas dessas e outras variedades, contribuindo para certificar a produção de farinhas com elevado conteúdo de compostos antioxidantes.
AGRADECIMENTOS: Os autores agradecem aos agricultores de Anchieta por cederem as sementes de milho utilizadas nesse trabalho. À CAPES pelo auxílio financeiro.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICA: ADOM, K.K.; LIU, R.H.. Antioxidant activity of grains. Journal of Agricultural and Food Chemistry, v. 50, p. 6182-6187, 2002.
KRIS-ETHERTON, P.M.; HECKER, K.D.; BONANOME, A.; COVAL, S.M.; BINKOSKI, A.E.; HILPERT, K.F.; GRIEL, A.E.; ETHERTON, T.Y.D. Bioactive Compounds in Foods: Their Role in the Prevention of Cardiovascular Disease and Cancer. The American Journal of Medicine, v. 113, n. 9B, p. 71S-88S, 2002.
OGLIARI, J.B.; ALVES, A.C. Manejo e uso de variedades de milho em comunidades de agricultores de Anchieta como estratégia de conservação. In: BOEF De, W.S.; THIJSSEN, M.; OGLIARI, J.B.; STHAPIT, B. (Eds.). Estratégias participativas de manejo da agrobiodiversidade. Florianópolis-SC, NEABio, 2006.
OWEN, R.W.; GIACOSA, A.; HULL, W.E.; HAUBNER, R.; SPIEGELHALDER, B.; BARTSCH, H. The antioxidant/anticancer potential of phenolic compounds isolated from olive oil. European Journal of Cancer, v. 36, p. 1235-1247, 2000.
SERNA-SALDIVAR, S.O.; GOMEZ, M.H.; ROONEY, L.W. Food Uses of Regular and Specialty Corns and Their Dry-Milled Fractions. In: HALLAUER, A.R. (Ed.). Specialty corns. 2a ed. CRC Press, Boca Raton, London, 2001. CD-ROM.
