ÁREA: Materiais
TÍTULO: IMOBILIZAÇÃO DE OLIGONUCLEOTÍDEOS EM ELETRODOS MODIFICADOS COM POLI(ÁCIDO 3-HIDROXIFENILACÉTICO)
AUTORES: HEDEN C. ALVES (UFU) ; SABRINA N. VIEIRA (UFU) ; ANA G. BRITTO-MADURRO (UFU) ; JOÃO M. MADURRO (UFU)
RESUMO: Polímeros condutores funcionalizados têm atraído grande atenção no estudo de hibridação de DNA devido à elevada área de superfície condutora do transdutor. Neste trabalho foram utilizados eletrodos de grafite modificados com filme derivado do acido 3-hidroxifenilacético feito por eletropolimerização potenciodinâmica. Foi realizado o estudo de imobilização, bem como investigação sobre a hibridização de oligonucleotídeos, por meio de voltametria de pulso diferencial.
PALAVRAS CHAVES: poli(ácido 3-hidroxifenilacético), hibridização, oligonucleotídeos
INTRODUÇÃO: Biossensores de DNA (ou genossensores) são dispositivos analíticos resultantes da integração de uma seqüência de sonda específica (geralmente
uma breve síntese de oligonucleotídeo) e um transdutor. A sonda, imobilizada na superfície do transdutor reconhece a molécula-alvo de DNA, enquanto que o transdutor é o componente que converte o sinal biológico em um sinal mensurável (LUCARELLI et al., 2008).
Polímeros conjugados para imobilização de oligonucleotídeo oferecem
extraordinário potencial como transdutores para detecção de dupla fita de DNA, porque as propriedades elétricas, ópticas, e eletroquímicas são fortemente afetadas por perturbações relativamente pequenas. Em particular polímeros condutores funcionalizados têm atraído grande atenção no estudo de hibridação de DNA devido à elevada área de superfície condutora do transdutor (BRITTO-MADURRO et al., 2007; FERREIRA et al., 2008 e KO et al., 2008).
Este trabalho visa estudar a incorporação de oligonucleotídeo sobre eletrodos modificados com filme polimérico derivado do ácido 3-hidroxifenilacético.
MATERIAL E MÉTODOS: Os estudos eletroquímicos foram feitos em cela de três compartimentos. Grafite, platina e eletrodo de Ag/AgCl foram utilizados como eletrodos de trabalho, auxiliar e de referência, respectivamente. O ácido 3-hidroxifenilacético foi solubilizado em solução de ácido perclórico. A solução de ácido 3-hidroxifenilacético foi deaerada com nitrogênio ultra puro e transferida para a cela eletroquímica. Os estudos de formação do filme polimérico foram realizados por sucessivas varreduras de potencial.
Para o estudo de imobilização utilizou-se dois eletrodos de grafite modificados com filme polimérico aos dois foi imobilizado poli A -15pb. Um eletrodo foi utilizado como branco e os estudos de hibridização foram feitos adicionando-se poli T-15pb ao eletrodo modificado contendo poli A. Antes e depois da imobilização foi feita a varredura de potencial utilizando a técnica de voltametria de pulso diferencial.
RESULTADOS E DISCUSSÃO: Na Figura 1 pode-se observar a formação do filme por meio do aumento dos picos de oxi-redução em torno de 0,52V e 0,37V, com o aumento do número de varreduras.
O poli A adsorvido pôde ser visto pelo pico em 1,18V, representado na Figura 2A.
A partir de um eletrodo contendo poli A foi feita a incorporação hibridização com solução de poli T 15-pb a e feita uma varredura de potencial. Notou-se que houve um decréscimo na corrente para o eletrodo hibridizado comparado com outro que continha somente poli A e essa diferença foi de aproximadamente 50%, como mostrado na figura 2B.
CONCLUSÕES: Concluiu-se que pôde ser feito o filme derivado do ácido 3-hidroxifenilacético por meio de sistemas eletroquímicos, o qual pode ser utilizado na imobilização de oligonucleotídeos por meio de adsorção. Foi possível a detecção das moléculas de poli A e também a hibridização da mesma com o oligonucleotídeo poli T.
AGRADECIMENTOS:
Os autores agradecem a CAPES, FAPEMIG e PROPUFU pelo apoio financeiro.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICA: BRITO-MADURRO, A. G.; FERREIRA, L. F.; VIEIRA, S. N.; GOULART FILHO, L. R.; MADURRO, J. M. 2007. Immobilization of purine bases in poly-4-aminophenol matrix. Journal of Materials Science, 42: 3238-3243.
FERREIRA, L. F.; BOODTS, J. F. C.; BRITO-MADURRO, A. G.; MADURRO, J. M. 2008. Gold electrodes modified with poly(4-aminophenol): incorporation of nitrogenated bases and an oligonucleotide. Polymer International, 57: 644-650.
KO, S.; JANG, J. 2008. Label-free target DNA recognition using oligonucleotide-functionalized polypyrrole nanotubes. Ultramicroscopy, doi:10.1016/j.ultramic.2008.04.045.
LUCARELLI, F; TOMBALLI, S; MINUNNI, M; MARRAZZA, G; MASCINI, M. 2008. Electrochemical and piezoelectric DNA biosensors for hybridisation detection. Analytica. Chimica. Acta, 609: 139-159.
