ÁREA: Produtos Naturais
TÍTULO: ATIVIDADE ANTI-RADICAL LIVRE DOS CONSTITUINTES DO LÍQUIDO DA CASCA DA CASTANHA DE CAJU (LCC) IN VITRO.
AUTORES: COSTA OLIVEIRA, M. S. (UECE) ; MAGALHÃES, D. V. (UECE) ; QUEIROZ, V. A. (UECE) ; VIEIRA. I. G. P. (UECE) ; MORAIS, S. M. (UECE)
RESUMO: O presente estudo visou isolar os constituintes do LCC natural e técnico e determinar suas atividades antioxidantes. O LCC natura é obtido diretamente das cascas das castanhas por extração por solvente de baixo ponto de ebulição como o hexano. O LCC técnico é produzido nas indústrias de processamento da castanha. O primeiro é constituído principalmente do ácido anacárdico (70%) e cardol (10%) e o segundo de cardanol (70%) e cardol (10%). Estes compostos são metil-alquil-fenois que diferem na insaturação da cadeia lateral. Foi avaliada a atividade anti-radical livre dos constituintes do LCC, utilizando-se o radical DPPH. A ordem de atividade anti-radical livre foi: Cardol > ácido anacárdico > cardanol. O efeito do Cardol pode ser atribuído às duas hidroxilas fenólicas de seus componentes.
PALAVRAS CHAVES: lcc (líquido da castanha de caju), atividade antioxidante, hplc (high-performance liquid chromatography).
INTRODUÇÃO: O cajueiro é considerado uma cultura de alto valor econômico e social para a região Nordeste do Brasil. O cajueiro (Anacardium occidentale L.) no Ceará encontra-se principalmente nas regiões litorâneas e zonas de transição litoral-sertão (MAIA, 1978).
Os ácidos anacárdicos são compostos fenólicos biossintetizados a partir de Acetil-CoA e constituem cerca de 70 % do líquido da casca da castanha de caju (LCC natural). Estes lipídeos fenólicos apresentam o núcleo do ácido salicílico e uma cadeia lateral de 15 carbonos, que pode conter uma, duas ou três ligações insaturadas, AGOSTINI-COSTA et al. (2005). Existe o LCC técnico que é um subproduto das indústrias de beneficiamento da castanha, cujo principal constituinte é o cardanol, produto de descarboxilação do ácido anacárdico. As estruturas dos derivados do LCC são mostradas na Figura 1.
A maioria dos antioxidantes de plantas superiores são polifenóis, que mostram também atividades biológicas como antibacteriana, anticarcinogênica, antiinflamatória, antialérgica, estrogênica e imuno-estimulante. As propriedades antioxidantes dos fenóis são devidas às suas propriedades de oxirredução, que permitem a eles agirem como agentes redutores, doadores de hidrogênio e eliminador de oxigênio singlete, GUERRA (2001).
Polifenóis são os antioxidantes mais abundantes de nossa dieta. As principais classes de polifenóis são ácidos fenólicos (principalmente ácido cafeico) e flavonóides como rutina, quercetina, isovetexina, a epicatequina e as proantocianidinas, antocianinas e seus produtos de oxidação.
O presente estudo visou isolar os constituintes do LCC natural e técnico e determinar suas atividades anti-radical livre visando aplicações biológicas.
MATERIAL E MÉTODOS: Os constituintes do LCC foram obtidos de acordo com a metodologia de PARAMASSHIVAPPA et al. (2001), como segue:
• 100g de LCC natural foi dissolvido em metanol como 5% de água e adicionam-se lentamente 50 g de hidróxido de cálcio. O precipitado formado de anacardato de cálcio foi filtrado e lavado com metanol e acondicionado a vácuo (45-50 ºC) por 2 h, suspendido em água destilada e HCl 11M , extraído com acetato de etila e seco com Na2SO4, evaporado obtendo-se assim o ÁCIDO ANACÁRDICO. À solução metanólica resultante foi adicionado licor amoniacal a 25% (200 mL) e agitado por 15 min. Da solução obtida foi extraído o CARDOL (18,54%), com uma mistura de hexano/acetato de etila (98:2) (3 x 100 mL), lavada em 100 mL de HCl 5%, seguido de água destilada. O material foi seco sob Na2SO4 e concentrado obtendo-se 20,39 g. A camada orgânica foi lavada com NaOH 25% (200 mL), seguida por HCl 5% (100 mL) e água destilada (100 mL). A mesma também seca com Na2SO4 e concentrada para obter CARDANOL puro (0,88 g), 8,4%. O solvente foi evaporado e os constituintes foram identificados por comparação com padrões em HPLC (High-performance liquid chromatography). Utilizou-se um cromatógrafo Shimadzu SPD-10VP [Fase móvel: água acidificada pH 2,8 (80%) e acetonitrila (20%), com o comprimento de onda de 280nm.
• Determinação da Atividade Anti-Radical Livre DPPH
De acordo com YEPEZ et al. (2002), em um tubo de ensaio, colocam-se 3,9 ml de solução metanólica 6,5 x 10-5 M do radical livre DPPH e, em seguida, adiciona-se 0,1 ml de solução metanólica da amostra a ser testada (100 ppm; 1 mg / 10 mL). As leituras são feitas em espectrofotômetro a 515 nm.O teste é realizado em triplicata e os resultados são positivos se a absorbância decresce com o tempo, BRAND-WILIANS et al.1995.
RESULTADOS E DISCUSSÃO: O rendimento da extração do LCC a partir das cascas da castanha para isolamento de seus constituintes foi para o ácido anacárdico 71,3%, cardanol 8,4% e cardol 20,3%. Estes dados apresentam-se de acordo com os encontrados na literatura por PARAMASSHIVAPPA et al. (2001).
A análise no HPLC do LCC natural forneceu o cromatograma apresentado na Figura 2. Os diversos constituintes do LCC foram separados e cada pico no cromatograma correspondeu a um constituinte, como segue: picos 1,2 e 3 Cardol;5,6 e 7 Ácido Anacárdico e 9,10 e 11 Cardanol.
Na análise anti-radical livre os mais ativos são os cardóis > ácidos anacárdicos > cardanóis como mostrados na Tabela 1, quando comparados nas maiores concentrações obtidas, valores semelhantes foram obtidos por RODRIGUES et al.(2006).
TREVISAN et al. (2006), ao determinarem a atividade antioxidante dos constituintes do LCC frente às enzimas xantina oxidase e superóxido dismutase, verificaram que os ácidos anacárdicos apresentaram maior atividade, seguido do cardol e cardanol.
No nosso trabalho foi utilizado o método do radical DPPH, que difere aos mecanismos anitoxidantes do método enzimático, calculando o IV50 (concentração que inibe 50% do DPPH) para o cardol que apresentou a maior atividade antioxidante, os dois constituintes do cardol apresentaram valores significativos e o cardol com duas duplas na cadeia lateral foi o mais ativo (Tabela 2). Os dois grupos hidroxila do cardol, são responsáveis por uma maior capacidade de captura de radicais livres e as insaturações da cadeia lateral interferem positivamente nesta ação (Figura 3). OHKATSU et al. (2003) propuseram que alguns fenóis com substituintes alílicos podem capturar radicais como peróxidos e superóxidos aumentando sua atividade antioxidante.
CONCLUSÕES: De acordo com os resultados obtidos dos derivados do LCC, o cardol foi o que apresentou a melhor atividade anti-radical livre. Dentre os constituintes do Cardol, o 8Z, 11Z, 14-Pentadecatrienyl (Cardol-1) foi o que apresentou IV50 (0,021 mM). Assim concluímos que o essa substância pode ser utilizada como um potente antioxidante natural, considerando o baixo custo do produto, já que o mesmo é descartado nas indústrias de beneficiamento de castanha de caju.
AGRADECIMENTOS: Ao Parque de Desenvolvimento Tecnológico do Ceará – PADETEC pela identificação dos constituintes do LCC, pelo HPLC.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICA: AGOSTINI-COSTA T. S.; JALES K. A.; OLIVEIRA M. E. B.; GARRUTI D. S. 2005. Determinação espectrofotométrica de ácido anacárdico em amêndoas de castanhas de caju. Comunicado Técnico 122, EMBRAPA, BrasíliA.
BRAND-WILLIANS W. & CUVELIER M., E.BERSET C. 1995. Use of free radical method to evaluate antioxidant activity. Food Science Technology, 28: 25-30.
GUERRA E. J. I. 2001. Oxidative stress, diseases and antioxidant treatment. Anais Medicinal Internal, 18: 326-335.
MAIA, D. 1978. Esboço da ecologia agrícola do Nordeste. SEPLAN/MA, 372.
OHKATSU Y., MATSUURA T., A. MITSUGU. 2003. A phenolic antioxidant trapping both alkyl and peroxy radicals. Polymer Degradation and Stability, 81: 151-156.
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RODRIGUES F. H. A., FEITOSA J. P.A. FRANÇA F. C. F. CARIOCA O.B. 2006. Antioxidant Activity of Cashew Nut Shell Liquid (CNSL) Derivatives on the Thermal Oxidation of Synthetic cis-1,4-Polyisoprene. Journal Brasilian Chemistry Society, 17: 265-271.
TREVISAN M. T. S. , PFUNDSTEIN B., HAUBNER R., WÜRTELE G., SPIEGELHALDER B., BARTSCH H., OWEN R. W. 2006. Characterization of alkyl phenols in cashew (Anacardium occidentale) products and assay of their antioxidant capacity Food and Chemical Toxicology, 44: 188-197.
YEPEZ, B.; ESPINOSA, M.; LOPEZ, S.; BOLANOS, G. 2002. Producing antioxidant fractions from herbaceuos matrices by supercriticalfluid extraction. Fluid Phase Equilibra, 254: 879-884.
