ÁREA: Produtos Naturais
TÍTULO: ESTUDOS FITOQUÍMICO E AVALIAÇÃO PRELIMINAR DE DANOS CITOGENÉTICOS E ATIVIDADE ANTICOLINESTERÁSICA DE ÓLEOS DE COPAIFERA
AUTORES: FERREIRA, C. P. (UESPI) ; CARVALHO, L. C. B (UFPI) ; BATISTA, N. C. (UESPI) ; DE LIMA, S. G. (UFPI) ; CAVALCANTE, A.A. M. C. (UFPI) ; FEITOSA, C. M. (UFPI) ; CITÓ, A. M. G. L. (UFPI) ; BARATA, L. E. S. (UNICAMP) ; NETO, J.M.M. (UFPI) ; LOPES, J. A. D. (UFPI)
RESUMO: Este trabalho descreve a composição química de óleos de Copaifera sp e C. multijuga, bem como uma avaliação preliminar da atividade genotóxica in vivo e atividade anticolinesterásica in vitro. Em geral, os óleos de copaíba apresentam-se ricos em componente neutros, sesqui e diterpenos (cerca de 60%) e ácidos diterpenóicos (AD), dos quais quatro foram isolados e caracterizados como: ácido copálico, ácido-(+)-hardwíckico, 16-kauren-19-óico e o ácido enantio-agático. Estudos preliminares dos óleos (157 mg) em camundongos tratados com ciclofosfamida ocasionou óbitos. Na mesma concentração efeitos citotóxicos foram observados em medula e sangue periférico. Amostras de C. multijuga e Copaifera sp, apresentando atividade positiva para inibição da enzima acetilcolinesterase.
PALAVRAS CHAVES: copaifera sp, copaifera multijuga, genotoxicidade
INTRODUÇÃO: As copaibeiras são árvores comuns na América Latina, em especial no sul do Brasil e na região Amazônica. Pertencentes ao gênero Copaifera (Leguminosae – Caesalpinoideae), contam com mais 60 espécies catalogadas. Dessas árvores é exsudado, através de incisões realizadas no tronco, um óleo-resina, chamado de óleo de copaíba, utilizado na medicina popular brasileira como: anti-inflamatório, antiulcerogênico, bactericida, bronquites, infecções do sistema pulmonar e urinário, e ainda no combate a diferentes tipos de câncer (GRAMOSA et al., 2005; CASCON, 2004; VEIGA J. e PINTO, 2002).
Estudos recentes fornecem uma visão geral da farmacologia e da composição química de apenas algumas espécies (GRAMOSA et al., 2005; CASCON, 2004; VEIGA J. e PINTO, 2002). Entre seus constituintes isolados, o ácido kaurenóico possui in vitro atividade anti-parasítica, anti-microbial; anti-proliferativa em culturas de células tumorais e efeito hemolítico em eritrócitos de ratos e humanos (CAVALCANTI et al., 2006). O ácido kaurenóico, um dos componentes dos óleos possui atividade genotóxica in vitro (CAVALCANTI et al., 2006). Esses dados sugerem a necessidade de mais estudos sobre a mutagenicidade dos óleos em uma bateria de testes genotóxicos, em benefícios da saúde humana.
Como parte do projeto de pesquisa (FERREIRA et al., 2007; LIMA et al., 2006;), “Estudo da Composição Química e atividade Biofarmacológica de Constituintes Fixos e Voláteis de Plantas do Estado do Piauí”, este trabalho descreve a composição química de óleos de Copaifera sp e C. multijuga, bem como uma avaliação preliminar da atividade genotóxica in vivo e atividade anticolinesterásica in vitro.
MATERIAL E MÉTODOS: As amostras de óleos de copaíba foram coletadas em diferentes municípios do Estado de Rondônia, fornecidas pelo Prof. Dr. Lauro Barata (Unicamp). Realizou-se uma análise comparativa entre 8 (oito) amostras de óleo bruto de Copaifera ssp e uma amostra de óleo da Copaifera multijuga, através de CCD (Cromatografia em Camada Delgada) e CGAR-EM (cromatógrafo CG-17A acoplado a um detector seletivo de massa QP5000-MSD), FERREIRA et al, 2007. Um grama de óleo foi submetido à separação cromatográfica em coluna de gel de sílica (CC), eluída com hexano:acetato de etila, utilizando gradiente de eluição.
Inibição da enzima acetilcolinesterase (AChE): Foram feitos alguns ensaios preliminares para testes de inibição da acetilcolinesterase com o óleo bruto da C. multijuga Hayne e de uma amostra de óleo de Copaifera sp (São Miguel do Guaporé – RO), através do método de ELLMAN et al. (1961), adaptado para CCD por RHEE et al. (2001). Os resultados positivos para a inibição da enzima AChE foram evidenciadas pelo aparecimento de manchas brancas em campo de coloração amarela.
Teste de micronúcleos: O teste de micronúcleos têm como finalidade identificar substâncias que causam formação de micronúcleos como um resultado de quebra de cromossomos (clastogenicidade) e perda do cromossomo (aneugenicidade). As freqüências de micronúcleos foram examinadas em amostras de linfócitos de sangue periférico e medula óssea de camundongos submetidos ao tratamento com óleos em estudo. O teste de micronúcleos foi realizado de acordo com FENECH (1993). Foram contadas no mínimo 1000 células binucleadas (BCN) e a freqüência de linfócitos micronucleados foi determinada.
RESULTADOS E DISCUSSÃO: Os óleos de Copaifera spp em estudo são compostos basicamente de hidrocarbonetos sesquiterpênicos e de ácidos diterpênóicos (AD). Entre os óleos de copaíba estudados há muita semelhança na composição de sesquiterpenos, ocorrendo maiores diferenças na composição de AD. Uma amostra de óleo (de São Miguel do Guaporé - RO) foi submetida à CC e sua composição foi comparada à da C. multijuga, por CGAR-EM, indicando muita semelhança.
As análises preliminares por CGAR-EM dos óleos brutos, mostraram que os mesmos apresentam como principais constituintes, os sesquiterpênicos: beta e delta elemeno, alfa-copaeno, trans-cariofileno, zingibereno, beta-bisaboleno, delta-cadineno e 11 (onze) AD, sendo quatro destes isolados da C. multijuga e caracterizado como: ácido copálico (1), ácido (+)-hardwíckico (2), ácido 16-kauren-19-óico (3) e ácido enantio-agático (4), Figura 1:
Pesquisas apontam drogas provenientes de produtos naturais como sendo eficazes no tratamento da doença de Alzheimer. Uma das abordagens consiste no tratamento colinérgico da doença, e o método que demonstrou maior eficácia clínica é o uso de inibidores diretos da enzima AChE (TREVISAN et al., 2006). Nesse sentido, ensaios preliminares da atividade da AChE com o óleo bruto da C. multijuga Hayne foram evoluídos, apresentando atividade nas concentrações testadas (5 e 10 mg/mL).
Dados preliminares dos ensaios de genotoxicidade/antigenotoxicidade com a aplicação do teste de micronúcleo indicam a necessidade de realizar estudos detalhados sobre a dose-resposta. Inicialmente, observou-se que 157 mg (cerca de 0.1 ml) administrada por gavagem em camundongos em tratamento com ciclofosfamida ocasiona óbitos. O tratamento somente com óleo ocasionou citotoxicidade em sangue periférico e medula óssea.
CONCLUSÕES: Em geral, os óleos de copaíba apresentam-se ricos em componente neutros, sesqui e diterpenos (~60%) e ácidos diterpenóicos, dos quais quatro foram caracterizados como: ácido copálico, ácido-hardwíckico, 16-kauren-19-óico e o enantio-agático. Ensaios preliminares, in vitro, da atividade da AChE com o óleo bruto da C. multijuga foram evoluídos, sendo positiva nas concentrações 5 e 10 mg/mL. Testes in vivo, indicaram citotoxicidade em sangue periférico e medula óssea. Os dados sugerem a necessidade de estudos detalhados sobre a relação dose-resposta para avaliação de danos e/ou proteção do DNA.
AGRADECIMENTOS: Lapetro, DQ – UFPI, Fapepi e a Uespi pela bolsa concedida a Cirley Ferreira.
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