ÁREA: Química Analítica
TÍTULO: Efeito do Capeamento em Fases Estacionárias para Cromatografia Líquida de Alta Eficiência na Separação de Fármacos
AUTORES: GUERRA, C. S. (UNICAMP) ; FARIA, A. M. (UNICAMP) ; JARDIM, I. C. S. F. (UNICAMP)
RESUMO: O recobrimento polimérico não uniforme é um fator limitante para determinadas aplicações das fases estacionárias (FE) baseadas em suporte de sílica metalizada. Neste trabalho, foi feito o capeamento de uma FE baseada em suporte de sílica zirconizada para minimizar interações indesejáveis dos grupos ativos de alta acidez do suporte com compostos básicos. A FE capeada foi comparada à uma similar não capeada através da separação de fármacos com características básicas, ácidas e polares, e ambas possibilitaram a separação efetiva dos fármacos. No entanto, a FE capeada apresentou picos mais simétricos e menores tempos de retenção devido ao melhor recobrimento dos grupos silanóis residuais do suporte com o capeamento, minimizando as interações indesejáveis com os componentes da amostra.
PALAVRAS CHAVES: fases estacionárias, capeamento, fármacos
INTRODUÇÃO: As fases estacionárias baseadas na imobilização de polímeros pré-sintetizados sobre suportes de sílica metalizada foram desenvolvidas há praticamente uma década, apresentando-se como uma alternativa atrativa às fases comerciais quimicamente ligadas devido à estabilidade química aumentada em condições alcalinas de fase móvel (SILVA e COLLINS, 1999; MELO e JARDIM, 1999). No entanto, as fases com sílica metalizada apresentam características ácidas devido ao recobrimento polimérico não uniforme da superfície do suporte, deixando alguns grupos ativos superficiais expostos. Este fato torna-se um inconveniente na análise de amostras contendo substâncias básicas devido à forte interação, em alguns casos irreversíveis, destas com os grupos residuais ácidos não recobertos pela camada polimérica (FARIA et al., 2006). Para contornar este problema, neste trabalho foi preparada uma fase estacionária a partir da imobilização do poli(metiltetradecilsiloxano) (PMTDS) sobre sílica zirconizada seguida da adição de grupos trimetilsilil, os quais foram ligados aos grupos residuais, através da reação de capeamento (GRITTI e GUIOCHON, 2005) no intuito de minimizar as interações indesejáveis dos grupos residuais com os componentes das amostras, sobretudo, os básicos.
MATERIAL E MÉTODOS: As fases estacionárias foram preparadas pela adição de partículas de sílica Kromasil zirconizada (5 um) a uma solução a 10 % (m/v) de PMTDS em hexano, a mistura foi agitada por 3 h e deixada em repouso por 6 dias para a evaporação do solvente à temperatura ambiente. Em seguida, o material seco foi colocado em tubo de aço inox e submetido à imobilização térmica a 110 ºC por 12 h. Para remoção do PMTDS não imobilizado sobre o suporte, o tubo de aço inox foi conectado a uma bomba cromatográfica e a fase estacionária eluída com hexano, a 1,0 mL/min a 50 °C por 4 h. Uma porção do material imobilizado [Si-Zr(PMTDS)] foi submetida ao enchimento de uma coluna cromatográfica de 60 mm x 3,9 mm com pressão de 38 MPa. Enquanto que outra porção, antes do enchimento da coluna cromatográfica, foi submetida a uma reação sob refluxo com trimetilclorossilano (TMCS) e hexametildissilazano (HMDS) (70:30, v/v) por 48 h, para o capeamento de grupos residuais do suporte, não recobertos pelo polímero, [Si-Zr(PMTDS)ec]. Três diferentes misturas de fármacos, com características ácidas, básicas e polares, foram separadas empregando as duas colunas cromatográficas preparadas neste trabalho.
RESULTADOS E DISCUSSÃO: Após o preparo, as fases Si-Zr(PMTDS) capeada e não-capeada foram avaliadas quanto ao desempenho cromatográfico na separação de uma mistura teste padrão, obtendo eficiências de colunas de aproximadamente 80.000 pratos/m com parâmetros cromatográficos apropriados de separação e retenção para compostos apolares. Para a avaliação da importância da reação de capeamento na fase Si-Zr(PMTDS), três misturas de fármacos foram separadas pela fase capeada e, também, pela fase estacionária não-capeada, empregando diferentes composições de fase móvel. As duas fases apresentaram boas separações cromatográficas para todos os fármacos analisados, no entanto a fase capeada foi mais eficiente, resultando em picos mais simétricos, principalmente para os fármacos com características básicas devido à menor interação com grupos silanóis residuais do suporte. Além disso, os fármacos apresentaram, de uma forma geral, tempos de retenção mais reduzidos na fase capeada, possibilitando análises mais rápidas. A Figura 1 apresenta os cromatogramas da separação de uma das misturas de fármacos contendo sacarina, cafeína e fenacetina obtidos nas duas fases Si-Zr(PMTDS).
CONCLUSÕES: O preparo de fases estacionárias baseadas em suportes de sílica metalizada com atividade residual minimizada pela adição de grupos trimetilsilil, pelo processo de capeamento, mostrou ser um procedimento simples e efetivo, resultando em picos simétricos e tempos de retenção reduzidos para os fármacos com características polares, ácidas e básicas.
AGRADECIMENTOS: À FAPESP (processo n. 06/57.312-0) e ao CNPq.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICA: MELO, L.F.C; JARDIM, I.C.S.F. 1999. Development of C8 stationary phases immobilized by y-radiation on zirconized silica for high-performance liquid chromatographic applications. Journal of Chromatography A, 845: 423-431.
SILVA, R.B; COLLINS, C.H. 1999. Chromatographic evaluation of radiation-immobilized poly(methyloctyl-siloxane) on titanium-grafted silica. Journal of Chromatography A, 845: 417-422.
FARIA, A.M.; JARDIM, I.C.S.F.; COLLINS, K.E.; COLLINS, C.H. 2006. Immobilized polymeric stationary phases using metalized silica supports. Journal of Separation Science, 29: 782-789.
GRITTI, F.; GUIOCHON, G. 2005. Effect of the endcapping of reversed-phase high-performance liquid chromatography adsorbents on the adsorption isotherm. Journal of Chromatography A, 1098: 82-94.
