ÁREA: Química Analítica
TÍTULO: DESENVOLVIMENTO DE MÉTODO DE ANÁLISE DIRETA DE CONSTITUINTES INORGÂNICOS EM LEITE MATERNO POR ICP-MS
AUTORES: NASCIMENTO, R. S. (UFMG) ; AMORIM, M. F. P. (UFMG) ; BORGES NETO, W. (UFMG) ; MENDES, D. B. C. (ODETE VALADA) ; SILVA, J. C. J. (UFMG) ; CIMINELLI, V. S. T. (UFMG) ; SILVA, J. B. B. (UFMG)
RESUMO: No leite materno uma série de fatores relacionados com os hábitos alimentares e de vida das mães influenciam diretamente na presença de teores de elementos essenciais e tóxicos no leite (nível sócio-econômico, faixa etária, consumo de álcool ou cigarro, tipo de alimentação, entre outros). Nesse sentido, o objetivo deste trabalho foi desenvolver um método de análise direta de micro e macro-nutrientes presentes em leite materno, utilizando CFA-C como solvente/diluente, com determinação por ICP-MS. Para avaliar a exatidão do método proposto, utilizamos o teste t-pareado, onde encontramos resultados estatisticamente iguais aos valores certificados.
PALAVRAS CHAVES: leite materno, cfa-c, icp-ms.
INTRODUÇÃO: O leite, geralmente, constitui-se na única fonte de nutrientes durante a infância e sua composição elementar é de fundamental importância para o crescimento infantil. Certos micro–constituintes essenciais, presentes no leite materno, mantém a integridade estrutural e funcional da criança em crescimento, de tal modo que uma deficiência ou excesso do mesmo pode induzir mudanças fisiológicas significativas. Em relação ao leite materno, uma série de fatores relacionados com os hábitos alimentares e de vida das mães ou das voluntárias que doam leite a maternidade, influenciam diretamente na presença e teores de elementos essenciais e tóxicos no leite (nível sócio-econômico, faixa etária, consumo de álcool ou cigarro, tipo de alimentação, entre outros). A determinação multielementar em amostras de alimentos e biológicas usando ICP-MS tem sido o foco de vários grupos de pesquisa. Em ICP-MS a etapa de pré-tratamento das amostras tem como objetivos principais, a dissolução da amostra e a redução das interferências espectroscópicas. Para inserção direta das amostras na fonte de excitação e aproveitamento da ampla faixa de resposta linear (calibração analítica) do ICP-MS, foi usado um reagente contendo uma mistura de aminas terciárias solúveis em água (CFA-C) como solvente/diluente, evitando uma manipulação exaustiva das amostras e permitindo que sejam evitadas as maiorias das contaminações indesejáveis impostas por reagentes normalmente usados, perdas por retenções quando o elemento de interesse reage com o frasco usado na calcinação e o tempo que se gasta nas mineralizações. O objetivo deste trabalho foi desenvolver um método de análise direta de micro e macro-nutrientes presentes em leite materno, utilizando CFA-C como solvente/diluente, com determinação por ICP-MS.
MATERIAL E MÉTODOS: O reagente CFA-C (Spectrasol, Warwick, NY, EUA), que consiste em uma mistura de aminas terciárias, foi utilizado no tratamento de soluções de referência de leite em pó certificado, onde foi determinado Ba, Ag, As, Be, Bi, Cd, Co, Cu, Pb, Mn, Ni, V, Se, Cr, Fe e Zn por ICP-MS (ELAN 9000, Perkin Elmer). As amostras foram diluídas na proporção de 0,1g/50 mL de solução 10% v/v de CFA-C e utilizou-se como padrão interno amostras a 1 ppm de In e Rh com 2% de HNO3. Ajustou-se o pH da solução de CFA-C para 8 com HNO3 concentrado. Segundo estudos feitos para análise direta de constituintes inorgânicos em leite bovino (NOBREGA et al., 1997), empregando uma mistura de aminas terciárias, dentre elas o CFA-C, esse reagente dissociaria parcial ou totalmente as micelas da caseína e estabilizaria os cátions em fase líquida. As condições instrumentais para as medidas por ICP-MS foram: 0,92 L min-1 para a vazão do gás do nebulizador, 9,5 V para voltagem das lentes e 1 kW para a fonte de rádio-freqüência. Foi utilizado uma solução multielementar (Std. 3, Perkin Elmer Pure Plus) 10 μg mL-1. Foi empregado o material de referência certificado de leite em pó, NIST SRM 1846 Infant formula (National Institute of Standards and Technology, Gaithersburg, MD, EUA). Utilizou-se água purificada em sistema Milli-Q (Millipore, Bedford, MA, EUA). As amostras foram preparadas em triplicatas independentes e analisadas em triplicatas aleatórias. Utilizamos o teste t-pareado para avaliar a igualdade estatística dos dados obtidos em relação aos valores certificado.
RESULTADOS E DISCUSSÃO: Em soluções de referência de leite em pó certificado, foram determinados Ba, Ag, As, Be, Bi, Cd, Co, Cu, Pb, Mn, Ni, V, Se, Cr, Fe e Zn por ICP-MS. Através do comportamento das variâncias das respostas instrumentais, observamos um comportamento heterocedástico (variâncias diferentes), e, por isso, utilizamos o Método dos Mínimos Quadrados Ponderado Absoluto para realizar a regressão linear. O uso do Método dos Mínimos Quadrados Ordinário, quando da presença de heterocedasticidade, causa erro sistemático proporcional a concentração do analito e erro na estimação de sua incerteza, levando à perda de rastreabilidade do resultado da medição (EURACHEM/CITAC Guide, 2003). Para avaliar a qualidade do ajuste da regressão, feita pelo Método dos Mínimos Quadrados Ponderado Absoluto, utilizamos resíduos padronizados ou reduzidos di/si e o valor de chi-quadrado reduzido, sendo que, ambos devem ter, em módulo, valores em torno de 1, para um bom ajuste e isso foi conseguido para todos os analitos estudados. Os limites de detecção e de quantificação do método de análise proposto, foram calculados como sendo 3 e 10 vezes o desvio-padrao das respostas instrumentais (LD = 3σ e LQ = 10σ) e estão apresentados na tabela 1. Utilizando material certificado de leite em pó, avaliamos a exatidão do método proposto, utilizando o teste t-pareado. O t-calculado de Student com n = 3 foi calculado para cada analito presente no material certificado e para todos os analitos, o tcalc ficou abaixo do t-valor de Student para um nível de confiança de 95% e 2 graus de liberdade = 4,303; demonstrando que os resultados obtidos são estatisticamente iguais aos valores certificados (tabela 2), garantindo assim, a rastreabilidade dos resultados analíticos.
CONCLUSÕES: Concluímos que o método proposto utilizando CFA-C como reagente é eficiente para determinação direta de constituintes inorgânicos em leite materno por ICP-MS, sem a necessidade de digestão prévia da amostra, minimizando o tempo e o custo da análise, diminuindo as possibilidades de contaminação da amostra e perdas de elementos voláteis.
AGRADECIMENTOS: Ao CNPq, FAPEMIG, Escola de Engenharia Metalúrgica e de Materiais da UFMG e a Maternidade Odete Valadares.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICA: EURACHEM/CITAC Guide, 2003. Traceability in Chemical Measument – A Guide to Achieving Comparable Results in Chemical Measurement. Voting Draft.
NÓBREGA, J. A.; GÉLINAS, Y.; KRUSHEVSKA, A.; BARNES, R. M.1997. Direct of major and trace elements in milk by inductively coupled plasma atomic emission and mass spectrometry. J. Anal. At. Spectrom.,12: 1243-1246.
