ÁREA: Bioquímica e Biotecnologia
TÍTULO: SÍNTESE ENZIMÁTICA DE TRIACILGLICERÓIS ESTRUTURADOS A PARTIR DE ÓLEO EXTRAÍDO DE RESÍDUOS DE SARDINHA: ESTUDOS PRELIMINARES
AUTORES: FELTES, M.M.C. (UFSC) ; PITOL, L.DE O. (UFSC) ; CORREIA, J.F.G. (UFSC) ; NINOW, J.L. (UFSC)
RESUMO: A Lipozyme RM IM® catalisou a reação de transesterificação entre triacilgliceróis de cadeia média e óleo de resíduos de sardinha, com o objetivo de produzir triacilgliceróis estruturados com benefícios nutricionais e terapêuticos. O óleo de peixe continha alto teor dos ácidos eicosapentaenóico (EPA) e docosahexaenóico (DHA): 12,1% e 16,5% do total de ácidos graxos, respectivamente, sem conter ácidos graxos de cadeia média. A reação foi conduzida durante 6 horas a 60°C (proporção mássica de 1:1, triacilgliceróis de cadeia média/óleo de peixe e 5% em massa dos reagentes de lipase). Após a reação, a análise do produto por cromatografia gasosa indicou que os triacilgliceróis do óleo de peixe continham 28% e 19% dos ácidos caprílico e cáprico, respectivamente, 11,85% de EPA e 17,52% de DHA.
PALAVRAS CHAVES: lipase, transesterificação, sardinha
INTRODUÇÃO: Os ácidos graxos da série ômega-3 eicosapentaenóico (EPA, C20:5) e docosahexaenóico (DHA, C22:6) são encontrados em grande quantidade em alimentos de origem marinha, com destaque para a sardinha-verdadeira (Sardinella brasiliensis). Durante o metabolismo, estes ácidos graxos produzem eicosanóides que atuam na prevenção de doenças cardiovasculares e alguns tipos de câncer. Já os ácidos graxos de cadeia média (6 a 12 átomos de carbono) são uma fonte rápida de energia. Os ácidos graxos ômega-3 podem ser combinados com ácidos graxos de cadeia média (cáprico, C10:0, e caprílico, C8:0, por exemplo) em uma mesma molécula, denominada triacilglicerol estruturado, que apresenta os efeitos fisiológicos atribuídos a cada um destes ácidos graxos. Este produto encontra aplicação, por exemplo, em nutrição clínica ou para administração em rações animais, visando ao enriquecimento de alimentos com triacilgliceróis com benefícios metabólicos (AKOH, 1995).
Neste trabalho, verificou-se a composição em ácidos graxos dos triacilgliceróis obtidos a partir da transesterificação de óleo obtido de resíduos de sardinha com triacilgliceróis de cadeia média (TCM), visando à síntese de triacilgliceróis estruturados de interesse nutricional. Na reação, utilizou-se uma lipase imobilizada (Lipozyme RM IM®) como biocatalisador.
MATERIAL E MÉTODOS: O óleo foi extraído dos resíduos de sardinha-verdadeira (Sardinella brasiliensis) (cabeças, vísceras, cauda, pele, espinha, escamas) segundo metodologia de BLIGH & DYER (1959) modificada (CHRISTIE, 1982). Os substratos (triacilgliceróis de cadeia média Trigliceril CM®, TCM, Support Produtos Alimentícios Ltda; óleo bruto de resíduos de sardinha) foram adicionados na proporção em massa de 1:1.
A Lipozyme RM IM® (Novozymes) foi usada na proporção de 5% (m/m) dos reagentes. A transesterificação ocorreu durante 6h a 60°C, sob pressão reduzida e com agitação magnética (DÍAZ GAMBOA E GIOIELLI, 2003).
Os óleos transesterificados foram aplicados em cromatofolhas de alumínio contendo sílica gel e revelador de fluorescência (Macherey-Nagel, Alemanha). A amostra foi eluída com hexano/éter etílico/ácido fórmico (80:20:2, vol/vol/vol) e as bandas foram visualizadas a 254nm. A fração referente aos triacilgliceróis foi raspada da placa e extraída da sílica com éter etílico (CHRISTIE, 1982), sendo submetida a esterificação (HARTMANN E LAGO, 1973) para a análise por cromatografia gasosa.
O perfil de ácidos graxos das amostras foi verificado no cromatógrafo gasoso Shimadzu modelo 17A (Shimadzu Co., Japão), equipado com detector de ionização de chama (FID). Foi utilizada coluna capilar de sílica fundida SP 2340 (Supelco) (60mx0,25mm; 0,2mm de polietilenoglicol). Condições da análise: gás de arraste: hélio (17mL.min-1); injetor: 240°C; detector: 260°C; coluna: 140°C por 5 min (4°C.min-1) até 240°C, na qual permaneceu por 5 minutos. Identificação dos picos por comparação dos tempos de retenção com padrões de ésteres metílicos. Composição quantitativa por normalização da área do pico do éster metílico de interesse em relação à área total dos picos identificados (% relativa em massa).
RESULTADOS E DISCUSSÃO: A Tabela 1 mostra que o óleo bruto extraído dos resíduos de sardinha apresentava uma proporção relativa de cerca de 30% de EPA e de DHA. Observa-se que houve diferença na proporção relativa de ácidos graxos presentes nos triacilgliceróis da mistura antes e depois da transesterificação. Estas diferenças podem ser explicadas pelo fato de o óleo de resíduos de sardinha ter sido utilizado na forma bruta, contendo, portanto, ácidos graxos livres, conforme já constatado em estudo anterior (FELTES et al., 2006a). Desta forma, os ácidos graxos na forma livre presentes no meio reacional também serviram como substrato para a reação enzimática, tendo sido incorporados aos triacilgliceróis.
Pela análise da composição em ácidos graxos, verifica-se que a transesterificação enzimática do óleo bruto extraído da sardinha modificou o perfil de ácidos graxos do produto: o óleo originalmente não continha ácidos graxos de cadeia média em sua composição, os quais passaram a estar presentes nos triacilgliceróis da mistura transesterificada em teores de 38,7%. A proporção relativa de ácidos graxos saturados após a reação foi de 71,4%, enquanto o óleo de peixe original apresentava cerca de 50% destes ácidos graxos. A utilização de substratos ricos em ácidos graxos de cadeia média permite a estruturação das moléculas de triacilgliceróis, conforme já verificado em outros trabalhos realizados com óleo de peixe comercial (DÍAZ GAMBOA E GIOIELLI, 2003; FELTES et al., 2006b).
A análise dos resultados apresentados na tabela indica um aumento da proporção relativa de EPA e DHA nos triacilgliceróis dos óleos após a reação enzimática, sugerindo que os ácidos graxos na forma livre, presentes no meio reacional, eram compostos principalmente por estes ácidos graxos de cadeia longa.
CONCLUSÕES: Neste estudo, demonstramos a possibilidade de síntese enzimática de triacilgliceróis estruturados de interesse nutricional, contendo EPA, DHA e ácidos graxos de cadeia média cáprico e caprílico, utilizando óleo bruto de resíduos de sardinha e TCM como substratos. É importante destacar que a qualidade da matéria-prima será decisiva para a possibilidade de aplicação posterior do óleo transesterificado para alimentação humana ou nutrição animal.
AGRADECIMENTOS: À CAPES pelo apoio financeiro. Novozymes e Support pelas doações. Prof. Francisco Deschamps (EPAGRI/UNIVALI, Brasil) pela realização das análises por cr
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICA: AKOH, C.C. 1995. Structured lipids: enzymatic approach. Inform, 6(9): 1055-1061.
AMERICAN OIL CHEMIST´S SOCIETY. 1997. Official methods and recommended practices of the AOCS. Champaign: AOCS.
BLIGH, E.G.; DYER, W.J. 1959. A rapid method of total lipid extraction and purification. Canadian Journal of Biochemistry and Physiology, 37: 911-917.
CHRISTIE, W.W. 1982. The analysis of simples lipid classes. In: Lipid analysis. 2 ed. Oxford: Pergamon Press. Cap. 6: 93-96.
DÍAZ GAMBOA, O.; GIOIELLI, L.A. 2003. Consistencia de lípidos estructurados a partir de aceite de pescado y grasa de palmiste. Grasas y Aceites, 54(2): 122-129.
FELTES, M.M.C.; PITOL, L.O.; CORREIA, J.F.G.; NINOW, J.L. 2006a. Caracterização físico-química de óleo de resíduos de sardinha (Sardinella brasiliensis). In: Anais do II Simpósio de Ciência e Tecnologia de Alimentos do Mercosul (CD-Rom), Cascavel.
FELTES, M.M.C.; PITOL, L.O.; CORREIA, J.F.G.; GRIMALDI, R.; NINOW, J.L. 2006b. Analysis of structured lipids synthesized by enzymatic transesterification of medium chain triglycerides and fish oil. In: Anais do XX Simpósio Íbero-Americano de Catálise (CD-Rom), Gramado.
HARTMANN, L.; LAGO, R.C.A. 1973. Rapid preparation of fatty acid methyl esters from lipids. Laboratory Practices, 22: 475-477.
