ÁREA: Química Analítica
TÍTULO: DETERMINAÇÃO DE GLICEROL EM CACHAÇAS PRODUZIDAS NA REGIÃO DE CAMPESTRE – MA EMPREGANDO REAÇÕES ENZIMÁTICAS E DETECÇÃO ESPECTROFOTOMÉTRICA
AUTORES: SANTIAGO, M. O (IC) - CESI/UEMA; DIAS, T. R. (IC) – CESI/UEMA; MIRANDA, J. C. (IC) - UEMA; FERNANDES, R.N (PQ) – UFMA; FERNANDES, E.N (PQ) – CESI/UEMA –UFMA
RESUMO: O procedimento proposto baseia-se na reação enzimática e detecção por espectrofotometria de absorção molecular. A determinação enzimática do glicerol baseia-se na reação de oxidação do glicerol pela a enzima glicerol de desidrogenase na presença do co-fator NAD+, o produto desta reação é monitorado espectrofotometricamente a 340 nm. Esta configuração permitiu a determinação de glicerol em cachaças sem diluição prévia da amostra, apresentando resultados concordantes com um kit comercial para determinação de glicerol, em nível de 95% de confiança. O sistema proposto apresentou as seguintes características: freqüência analítica de 48 determinações por hora; volume de amostra de 50 mL. A imobilização da enzima permitiu sua reutilização em cerca de 3000 determinações.
PALAVRAS CHAVES: análise por injeção em fluxo, glicerol, cachaça
INTRODUÇÃO: A cachaça é definida, segundo a legislação brasileira, como sendo bebida obtida do destilado alcoólico simples da cana de açúcar ou pela destilação do mosto fermentado de cana de açúcar com graduação alcoólica variando entre 38 e 54% (v/v)
a 20ºC.Dentre os compostos químicos da cachaça estão a água, os álcoois, os ácidos. O glicerol provém da fermentação, sendo o terceiro maior produto depois da água e do álcool etílico.O glicerol é responsável pelas características sápidas da bebida, dando a elas um gosto levemente adocicado. [1-2] Assim representa um importante parâmetro de controle de qualidade, pois alguns produtores adicionam glicerol fraudulentamente em busca de um produto final com gosto apurado. [2-4] Neste trabalho, propõe-se a determinação de glicerol em cachaças produzidas no município de Campestre no Maranhão.
MATERIAL E MÉTODOS: O procedimento proposto foi baseado em um módulo de análise em fluxo, que é constituído por um injetor comutador, tubos de tygon de diferentes diâmetros, tubos de polietileno. A detecção foi feita por um espectrofotômetro UV-VIS (FEMTO 700 PLUS), de absorção molecular, equipado com uma cela de fluxo em quartzo. Para propulsão de fluídos, foi utilizada uma bomba peristáltica ISMATEC IPC-8. Um microcomputador Pentium II, equipado com uma interface eletrônica (Advantech, PCL 711S) e um programa computacional escrito em linguagem Quick BASIC 4.5 foram empregados para aquisição de dados. A amostra foi inserida no fluído transportador tampão carbonato (pH 9,5), vazão 2,0 mL min-1, misturando-se com o reagente NAD+ (solução 6 x 10-3 mol L-1 , 1,0 min-1) por confluência, passando por um reator helicoidal. Em seguida a amostra passa por uma coluna contendo a enzima glicerol desidrogenase, imobilizada em esferas de vidro com porosidade controlada, que na presença do cofator NAD+ catalisa a reação de oxidação do glicerol produzindo dihidroxiacetona e NADH. A concentração de NADH produzido é diretamente proporcional à concentração de glicerol monitorado por espectrofotometria a 340 nm.
RESULTADOS E DISCUSSÃO: O procedimento proposto foi baseado em um módulo de análise em fluxo com configuração simples que permitiu o desenvolvimento de um procedimento analítico para determinação de glicerol empregando reação enzimática. Experimentos para otimização do procedimento resultaram nos seguintes parâmetros: volume da amostra: 50mL; bobina de reação: 50 cm; vazão de 2,0 mL/min e frequência analítica de 48 determinações por hora. Após a otimização dos parâmetros analíticos, obteve-se a curva analítica para glicerol na faixa de concentração linear entre 5 e 25 % (m/v) de glicerol; limite de detecção de 0,52 mmol L-1; coeficiente de variação: 0,85 % (n=10). O sistema foi aplicado em amostras de de cachaças produzidas no município de Campestre-MA. Os resultados obtidos foram comparados com procedimento manual, empregando kit comercial, não apresentando diferença significativa em nível de 95% de confiança. As amostras não apresentaram indicativo de adição fraudulenta de glicerol, encontrando-se dentro dos parâmetros da legislação brasileira para bebidas alcoólicas. As amostas foram analisadas diretamente no sistema em fluxo, não necessitando de nenhum tratamento prévio.
CONCLUSÕES: O sistema em fluxo proposto para determinação de glicerol em cachaças empregando reações enzimáticas e detecção por espectrofotometria permitiu a determinação do analito em amostras sem tratamento prévio, efetuando a diluição em linha. A reação enzimática, bastante empregada na literatura para a determinação de glicerol, [1-4] mostrou-se apropriada. Os resultados alcançados demonstraram a viabilidade do procedimento para aplicação em amostras com diferentes faixas de concentrações.
AGRADECIMENTOS:PIBIC/CNPQ; FAPEMA; CENA; UFMA
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICA:1. MATAIX, E. & LUQUE DE CASTRO, M. D. “Simultaneous determination of ethanol and glycerol in wines by flow injection-pervaporation approach with in parallel photometric and fluorimetric detection”. Talanta, 51: 489, 2000.
2. MATSUMOTO, K.; MATSUBARA, H.; HAMADA, M. & OSAJIMA, Y. “Simultaneous determination of glucose, ethanol, glycerol and sulfite in white wine by flow-injection analysis including parallel configuration of immobilized enzyme columns” J. Japanese Soc. Food Sci. and Tech. 38(8): 699, 1991.
3. KIBA, N.; AZUMA, N. & FURUSAWA, M. “Chemiluminometric method for the determination of glycerol in wine by flow-injection analysis with co-immobilized glycerol dehydrogenase NADH oxidase” Talanta 43(10): 1761, 1996.
4. FERNANDES, E. N. MOURA, M. N. C. LIMA, J. L. C. REIS, B. F. “Automatic procedure for determination of glycerol in wine using enzymatic reaction and spectrophotometry”. Microchemical Journal, 77 107, 2004.