ÁREA: Química Analítica
TÍTULO: AVALIAçãO DA SEPARAçãO CROMATOGRáFICA DE FáRMACOS EMPREGANDO NOVOS TIPOS DE FASES ESTACIONáRIAS REVERSAS PARA CLAE
AUTORES: ROSA, P. C. P.; - UNICAMP
FARIA, A. M.; - UNICAMP
COLLINS, C. H.; - UNICAMP
JARDIM, I. C. S. F. - UNICAMP
RESUMO: A separação de compostos com características ácidas ou básicas, empregando fases estacionárias convencionais para cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), ocorre normalmente de forma ineficiente, devido a interação indesejável destes compostos com grupos residuais do suporte cromatográfico. Neste trabalho, dois novos tipos de fases estacionárias, com melhor proteção do suporte foram preparadas e empregadas na separação de uma mistura de fármacos. Os resultados mostraram separações cromatográficas com resoluções adequadas, como conseqüência da eluição de picos simétricos e de alta eficiência para todos os fármacos estudados. Portanto, pode-se concluir que estas fases estacionárias se apresentam como alternativas potenciais para a separação de compostos com características ácidas.
PALAVRAS CHAVES: fases estacionárias, clae-fr, fármacos
INTRODUÇÃO: : A cromatografia líquida de alta eficiência na modalidade de fase reversa (CLAE-FR) é a principal técnica analítica empregada na análise de fármacos. Apesar do alto nível de qualidade alcançado pela CLAE-FR uma importante limitação, relacionada às fases estacionárias convencionais, ainda persiste; a interação indesejável de compostos polares com o suporte de sílica. Esta interação resulta na eluição de picos deformados que prejudicam a separação dos compostos, podendo, em casos extremos, ocorrer adsorção irreversível do composto na coluna, principalmente para compostos básicos. Para contornar esta limitação, vem sendo estudado o preparo de fases estacionárias alternativas, com melhor proteção do suporte cromatográfico (KIRKLAND, 2004). Neste trabalho, a separação de uma mistura de fármacos com características básicas, ácidas e neutras foi avaliada quanto ao comportamento cromatográfico empregando duas destas novas fases estacionárias, a primeira com um agente silano contendo um grupo polar embutido quimicamente ligado à sílica e (SILVA et al., 2006), a segunda, contendo um polissiloxano fisicamente adsorvido sobre sílica-titanizada (FARIA et al., 2006).
MATERIAL E MÉTODOS: A fase estacionária 1 foi preparada através da reação da sílica Kromasil 5 um com agente sililante contendo um organossilano monofuncional e grupo C8 para obtenção de uma fase com grupo polar embutido. A fase estacionária foi então protegida estericamente por capeamento com os agentes sililantes. A fase estacionária 2 foi preparada pela mistura de uma solução a 10 % (m/v) de poli(metiltetradecilsiloxano) (PMTDS) em hexano com partículas de 5 µm de sílica-titanizada. A mistura foi agitada por 3 h e deixada em repouso por 100 dias – auto-imobilização (COLLINS et al., 2002). Após este período, o material foi colocado em um tubo de aço inox, conectado a uma bomba e eluído com hexano a 1,0 mL min-1 a 50 °C por 4 h, para remoção do polímero não imobilizado. As colunas cromatográficas de 60 x 3,9 mm foram recheadas com 0,7 g da fase (10 %, v/v em clorofórmio) a uma pressão de 38 MPa. O sistema de CLAE utilizado nos experimentos foi da marca Merck-Hitachi Elite Lachrom composto de: bomba L-7130, forno L-2300, injetor L-2200, detector por arranjo de diodo L-2450 e software EZCHrom Elite. Soluções de paracetamol, cafeína, ácido acetilsalisílico e conservantes foram usadas na para separação.
RESULTADOS E DISCUSSÃO: As fases estacionárias apresentaram boa separação para os compostos paracetamol, cafeína, ácido acetilsalicílico e alguns conservantes como metilparabeno, propilparabeno, butilparabeno e o composto anti-oxidante butil hidroxianizol. Nas condições estudadas a separação dos compostos com as fases avaliadas apresentaram picos cromatográficos com reduzido fator de cauda e altos valores de pratos comparados com as fases estacionárias disponíveis comercialmente usadas na separação desses compostos. O método é considerado seletivo para os compostos avaliados e apresenta pureza de pico maior que 0,998.
Figura 1: Cromatograma dos compostos paracetamol e cafeína. Condições: coluna de PMTDS, fase móvel água:metanol:ácido acético (68:28:3 v/v/v); vazão 0,7 mL/min; temperatura 40 °C; detecção UV a 275 nm; volume de injeção 5uL.
CONCLUSÕES: Os parâmetros cromatográficos da separação dos compostos estudados mostraram que as fases estacionárias avaliadas foram eficientes na separação dos compostos aqui estudados sendo, portanto, uma alternativa às fases estacionárias convencionais disponíveis comercialmente. Os métodos utilizando as colunas recheadas com as fases 1 e 2 se mostraram de fácil execução, rápidos e com baixo consumo de fase móvel
AGRADECIMENTOS:CNPq, FAPESP e Medley Indústria Farmacêutica.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICA:COLLINS, K.E.; BOTTOLI, C.B.G.; VIGNA, C.R.M.; BACHMANN, S.; ALBERT, K.; COLLINS, C.H. 2004. Self-immobilization of poly(methyloctylsiloxane) on high-performance liquid chromatographic silica. Journal of Chromatography A, 1029: 43-48.
FARIA, A.M.; JARDIM, I.C.S.F.; COLLINS, K.E.; COLLINS, C.H. 2006. Immobilized polymeric stationary phases using metalized silica supports. Journal of Separation Science, 29: 782-789.
KIRKLAND, J.J. 2004. Development of some stationary phases for reversed-phase high-performance liquid chromatography. Journal of Chromatography A, 1060: 9-21.
SILVA, C.R.; COLLINS, C.H.; COLLINS, K.E.; AIROLDI, C. 2006. An overview of the chromatographic properties and stability of C18 titanized phases. Journal of Separation Science, 29: 790-800.